維生素C對人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞和裸鼠皮下移植瘤的影響.pdf

1、第一部分:維生素C對人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞的影響作用
　　目的:通過培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞，然后采用不同濃度維生素C處理SHG44細(xì)胞，用順鉑處理SHG44細(xì)胞作為陽性對照組，觀察維生素C對SHG44細(xì)胞增殖、凋亡的影響，以及對細(xì)胞中HIF-1α和VEGFmRNA表達(dá)水平的影響。探討維生素C對SHG44細(xì)胞的可能作用機(jī)制。
　　方法:通過培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞，將不同濃度維生素C(0、0.5、1.0、2.0、4.0、

2、8.0、10.0mmol/L)作用于處于對數(shù)生長期的SHG44細(xì)胞，MTT比色法檢測細(xì)胞的IC50值;然后將不同濃度維生素C(0、0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0mmol/L)和順鉑(20mg/L)作用于處于對數(shù)生長期的SHG44細(xì)胞，采用MTT法檢測細(xì)胞的生長抑制率;將維生素C(0、1.5mmol/L)和順鉑(20mg/L)作用于處于對數(shù)生長期的SHG44細(xì)胞24小時(shí)，采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡，用R

3、T-PCR法檢測SHG44細(xì)胞中HIF-1α和VEGFmRNA的相對表達(dá)。
　　結(jié)果:維生素C表現(xiàn)為濃度依賴性抑制SHG44細(xì)胞的生長。在570nm波長，維生素C作用24小時(shí)后，其IC50值為1.695mmol/L;當(dāng)維生素C的濃度大于1.25mmol/L，并作用SHG44細(xì)胞48小時(shí)后細(xì)胞出現(xiàn)明顯的增殖抑制并大量死亡;維生素C和順鉑對SHG44細(xì)胞的處理都使得細(xì)胞的早期凋亡較空白對照組顯著增加(P＜0.05)。維生素C和順鉑的處

4、理都使得S期的SHG44細(xì)胞較空白對照組減少(P＜0.05)。與空白對照組相比，常氧條件下，維生素C和順鉑的處理都能升高SHG44細(xì)胞中HIF-1αmRNA的表達(dá)，和降低VEGF mRNA的表達(dá)(P＜0.05);維生素C組和順鉑組兩組之間細(xì)胞中VEGFmRNA的表達(dá)其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:維生素C能夠抑制人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞的增殖，并且促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。維生素C的作用機(jī)制可能跟降低細(xì)胞中VEGF mRNA的

5、表達(dá)，抑制組織細(xì)胞的血管生成有關(guān)。
　　第二部分:維生素C對裸鼠皮下移植瘤的影響作用
　　目的:通過構(gòu)建人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞BALB/c型裸鼠皮下移植瘤模型。采用順鉑作為陽性對照組，觀察不同劑量的維生素C對裸鼠皮下移植瘤的生長抑制作用。以及對移植瘤組織細(xì)胞中HIF-1α和VEGFmRNA表達(dá)的影響。分析維生素C對膠質(zhì)瘤的潛在作用機(jī)制，為膠質(zhì)瘤的治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　方法:1、培養(yǎng)人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞并進(jìn)行傳代。

6、然后采用處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，吹打制成密度為2×107個(gè)/ml的單細(xì)胞懸液。抽取0.2ml注射入裸鼠皮下（背部右前肢外側(cè)）。在接種后2周檢查，接種部位皮下長出包塊，測量移植瘤體積，大約為100mm3，判定膠質(zhì)瘤模型制作成功。2、將4-5周齡的雌性裸鼠28只隨機(jī)分為4組，每組7只。空白對照組給予生理鹽水，0.4ml/只，腹腔注射，每兩天一次，共3周;維生素C低、高劑量組分別給予2g/kg、4g/kg每只，腹腔注射，每兩天一次，共3周;順鉑

7、組則給予順鉑2g/kg，腹腔注射給藥，每兩天一次，共3周。在用藥結(jié)束后第二天處死各實(shí)驗(yàn)組小鼠，并計(jì)算腫瘤體積以及抑瘤率。采用RT-PCR法檢測各實(shí)驗(yàn)組腫瘤組織細(xì)胞中HIF-1α和VEGFmRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1、成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型，腫瘤種植的成功率較高，達(dá)100％。2、維生素C可以抑制裸鼠皮下移植瘤組織的生長，且高劑量組對腫瘤的抑瘤率其結(jié)果要大于低劑量組。各實(shí)驗(yàn)組的腫瘤體積跟空白對照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P

8、＜0.05)。3、維生素C低、高劑量組都能夠降低兩種因子的表達(dá)，并且高劑量組降低得更明顯，與空白組相比，其差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。維生素C低、高劑量組和順鉑組比較，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:人膠質(zhì)瘤SHG44細(xì)胞建立裸鼠皮下移植瘤模型確實(shí)可靠，可以用于膠質(zhì)瘤的預(yù)防以及治療的實(shí)驗(yàn)性研究;在一定劑量范圍內(nèi)的大劑量維生素C可以抑制裸鼠皮下移植瘤的生長，表現(xiàn)出一定的抗腫瘤作用。其機(jī)制可能跟維生素C抑制組