miR-21通過靶定LRRFIP1調節(jié)膠質母細胞瘤對VM-26的敏感性.pdf

1、第二軍醫(yī)大學博士學位論文miR21通過靶定LRRFIP1調節(jié)膠質母細胞瘤對VM26的敏感性姓名：李一明申請學位級別：博士專業(yè)：神經外科指導教師：盧亦成20090501第二軍醫(yī)大學博士學位論文為了對靶基因的正確性進行驗證，我們先利用RTPCR和Westemblot技術檢測miR21功能被抑制后LRRFIPl的mRNA水平和蛋白水平的變化。實驗表明，封閉miR21的功能后，LRRFIPl基因在mRNA水平和蛋白水平上都明顯上調，為了進一步驗

2、證miR21與LRRFIPl的作用關系，我們采用了綠色熒光蛋白(EGFP)報告載體實驗，我們將預測到的LRRFIPl基因3’非編碼區(qū)與miR21互補結合的一段序列克隆插入報告基因EGFP的下游，構建熒光報告載體，轉染U373MG細胞，同時封閉miR21的功能，檢測發(fā)現miR21的功能被封閉后，EGFP的熒光強度明顯升高。而我們將報告載體中miR21的結合位點進行定點突變后，這種miR21變化導致的熒光強度變化不復存在。以上實驗證明，LR

3、RFIPI是miR21的直接作用靶基因，受到miR21的特異性調控。LRRFIPl(也稱TRAF作用蛋白，TⅪP)是腫瘤壞死因子受體超家族的成員之一，包含一個RjNG手指序列和一個擴展的coiledcoil區(qū)域。TR／P與腫瘤壞死因子受體相關因子組成的信號復合體相互作用，抑制TRAF2介導的NF。rB活化途徑，減低其對細胞凋亡的抑制作用。NFrB的活化是腫瘤拮抗化療藥物的主要機制之一。此外，抑制NFrB的活化后可增強腫瘤壞死因子a(n婚

4、口)或某些化療藥物對細胞凋亡的誘導效應。本實驗中，我們發(fā)現抑制miR21的功能可增加靶基因LRRFIPl的上調，從而抑制NFrB的活化，導致膠質瘤細胞對化療藥物VM26敏感性增強。本實驗首次分析了miR21與惡性膠質瘤化療藥物耐藥之間的關系，機制可能是miR21通過抑制LRRFIPl基因，從而激活NFrd3通路來降低化療藥物的毒性作用。我們希望通過對miR21的功能的研究為惡性膠質瘤的治療提供了新的思路和線索。但由于細胞和分子水平的調控