強脈沖光對大鼠皮膚膠原、轉(zhuǎn)化生長因子-β1的影響研究.pdf

1、背景： 細胞外基質(zhì)降解、膠原斷裂是皮膚光老化最核心的問題。因此，任何保持基質(zhì)膠原連續(xù)完整或促進基質(zhì)膠原增生的措施都可能有助于防治紫外線的皮膚光損害或達到治療光老化的目的。細胞外基質(zhì)中最主要的成分是真皮中的Ⅰ型膠原。而轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)在細胞外基質(zhì)膠原生物合成中扮演重要角色。 目的： 觀察并定量研究強脈沖光照射后Sprague Dawley(SD)大鼠皮膚膠原含量的變化及其隨時間的變化規(guī)律；同時對S

2、D大鼠皮膚TGF-β1的分布及強脈沖光照射后TGF-β1的變化趨勢進行觀察，以進一步闡明強脈沖光治療皮膚光老化的機制。 方法： 選取15只SD大鼠，兩側(cè)背部皮膚去毛，隨機選取一側(cè)皮膚為強脈沖光照射實驗組，對側(cè)背部皮膚作對照組。采用波長560-1200nm，能量密度27J/c㎡，脈寬3.0ms，雙脈沖方式，脈沖延時10ms強脈沖光照射實驗組皮膚，并分別于術(shù)后1天、1周、2周、3周、4周、6周、8周對實驗側(cè)和對照側(cè)皮膚取材，

3、進行HE常規(guī)染色、Van Gieson膠原特殊染色和Masson三色染色。觀察對比實驗組與對照組皮膚表皮、真皮膠原形態(tài)以及成纖維細胞數(shù)量變化，并作皮膚真皮Ⅰ型膠原蛋白免疫組化染色，圖像半定量分析不同時間點上膠原含量。同時，作大鼠皮膚轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1蛋白的免疫組化染色定位，觀察大鼠皮膚TGF-β1的分布情況以及強脈沖光照射后TGF-β1隨時間變化規(guī)律。 結(jié)果： 1、HE染色、膠原特殊染色觀察，強脈沖光照射前正常大鼠

4、皮膚真皮膠原纖細、稀疏，排列紊亂，成纖維細胞數(shù)目較少。強脈沖光照射術(shù)后2周、3周、4周、6周和8周時實驗組大鼠皮膚比照對照組，真皮膠原有較明顯的增生。膠原沉積的部位主要在大鼠真皮淺層，表現(xiàn)為真皮淺層膠原明顯增厚，膠原粗大，新生膠原順序重排，走向較一致，并大致與表皮方向平行，成纖維細胞增多。但皮膚深層膠原、照射后2周前的真皮淺層膠原形態(tài)、排序變化較對照組無明顯差異。術(shù)前術(shù)后皮膚表皮形態(tài)未見明顯變化。 2、強脈沖光照射后真皮淺層Ⅰ型

5、膠原蛋白免疫組化圖像半定量分析測定，結(jié)果強脈沖光照射實驗組與對照組比較Ⅰ型膠原蛋白含量均高于對照組(P<0.001)。重復測量方差分析說明實驗組與對照組比較膠原增生隨時間變化的趨勢明顯不同(F=3483，P<0.001)，不同時間點上膠原光密度值不同(F=296.3，P<0.001)，兩兩均數(shù)比較除6周和8周之間均有明顯差異(P<0.5)。實驗組強脈沖光照射后，大鼠皮膚真皮淺層膠原增生自2周起隨時間逐漸增強，至4周達到最大值，后稍有下降

6、。 3、轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1分布于大鼠正常皮膚全層，主要分布在細胞外結(jié)締組織基質(zhì)膠原纖維中。皮膚上皮細胞、附屬器毛囊上皮、皮脂腺分泌細胞等亦有較弱陽性表達。強脈沖光照射刺激大鼠皮膚分泌轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1，實驗組TGF-β1表達較對照組顯著增強，同樣，陽性產(chǎn)物主要分布在細胞外結(jié)締組織中。真皮淺層、毛囊周圍基質(zhì)中較對照組有非常強烈的棕黃色著染，同時皮膚表皮細胞亦出現(xiàn)明顯的陽性表達產(chǎn)物。陽性表達區(qū)成纖維細胞數(shù)量明顯增多。TG