氟喹諾酮類藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌防突變濃度及分子耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的: （1）建立體外防細(xì)菌突變濃度（MPC）的測(cè)定方法。比較4種不同化學(xué)結(jié)構(gòu)的氟喹諾酮類藥物防細(xì)菌耐藥突變的能力。（2）探討不同藥物濃度、不同化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物對(duì)突變選擇窗（MSW）。（3）應(yīng)用藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)（PK/PD）內(nèi)篩選的細(xì)菌耐藥突變體的耐藥基因的影響理論和MSW理論對(duì)臨床優(yōu)化氟喹諾酮類藥物給藥方案進(jìn)行初步探討。 方法: （1）采用瓊脂平板二倍稀釋法測(cè)定最低抑菌濃度（MIC）；肉湯富集法富集濃度>10

2、10 CFU/ml的鮑曼不動(dòng)桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC19606，接種至系列含藥的瓊脂平板上，測(cè)定氟喹諾酮類藥物對(duì)ATCC19606的MPC。菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定和描記細(xì)菌恢復(fù)生長(zhǎng)曲線。測(cè)定ATCC19606及其突變體的MSW、選擇指數(shù)（MPI）及對(duì)4種氟喹諾酮藥物的突變頻率。（2）在突變選擇窗內(nèi)篩選細(xì)菌耐藥突變體，應(yīng)用PCR擴(kuò)增耐藥基因gyrA和parC，DNA測(cè)序法和BLAST法確定其靶位突變位點(diǎn)。（3）測(cè)定34株環(huán)丙沙星敏感的鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分

3、離菌MPC和MPI（MPC/MIC），比較4種氟喹諾酮藥物臨床劑量下的防突變能力。 結(jié)果: 第一部分：CPLX、PZLX、LVLX、GTLX對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC19606的MIC結(jié)果分別為1，1，1，0．5μg/ml；四種氟喹諾酮類藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC19606的MIC99由低至高分別為：GTLX< LVLX< PZLX< CPLX。從MIC99結(jié)果來看，加替沙星的抗菌活性最強(qiáng)，分別是CPLX、PZLX、LVLX

4、的2．3、2、2倍。4種藥物的MPC值相差較大，從小到大依次為GTLX

5、種優(yōu)勢(shì)。 第二部分：在4種氟喹諾酮藥物對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌ATCC19606的MSW中隨機(jī)篩選了37株第一步突變體，第一步突變體對(duì)CPLX、PZLX的MIC90值較高，已經(jīng)耐藥，對(duì)LVLX、GTLX的MIC90值較低，中介耐藥或敏感。對(duì)37株第一步突變體菌株的gyrA與parC進(jìn)行突變分析，發(fā)現(xiàn)有2株菌同時(shí)發(fā)生了gyrA和parC的雙突變，占耐藥菌的5．4%；在單基因突變菌株中，gyrA19株，占耐藥菌的51．4%，parC6株，占耐

6、藥菌的16．2%。 第三部分：CPLX、PZLX、LVLX和GTLX對(duì)34株臨床分離的環(huán)丙沙星敏感的鮑曼不動(dòng)桿菌MPC90值分別為4，8，1和0．5μg/ml。而選擇指數(shù)MPC90/MIC90比值大小依次為：GTLX

7、FQ藥物加替沙星限制鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥突變株選擇的能力明顯強(qiáng)于PZLX、LVLX及C-8-氫FQ藥物CPLX，在較高濃度時(shí)則不存在這種優(yōu)勢(shì)。提示我們，臨床上如果應(yīng)用足夠劑量的PZLX、LVLX和CPLX進(jìn)行治療，可以抑制耐藥突變菌的產(chǎn)生，但必須注意其因血藥濃度過高而引起的毒副反應(yīng)。結(jié)合藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，GTLX單藥能有效限制耐藥突變株的選擇，而LVLX、PZLX和CPLX則容易選擇出耐藥突變株。對(duì)于GTLX敏感而對(duì)CPLX耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌，

8、其MSW范圍明顯增寬，GTLX單藥則不能限制耐藥突變株的選擇。為了保護(hù)新一代FQ藥物的抗菌活性，延長(zhǎng)其在臨床的應(yīng)用壽命，對(duì)于CPLX耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌，即使對(duì)新一代FQ藥物如GTLX仍敏感，也不建議單藥應(yīng)用。對(duì)氟喹諾酮耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌，其耐藥基因突變中旋轉(zhuǎn)酶gyrASer81→Leu突變最為頻繁，拓?fù)洚悩?gòu)酶IV parCAla→Asp的改變，也將產(chǎn)生對(duì)氟喹諾酮類抗菌藥物的低水平耐藥。當(dāng)gyrA基因和parC基因同時(shí)發(fā)生突變時(shí)，則表現(xiàn)出