粉防己堿對(duì)兔耳瘢痕增生組織Ⅰ、Ⅲ型膠原及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1基因表達(dá)的調(diào)控作用.pdf

1、目的：觀察粉防己堿(Tet)對(duì)兔耳瘢痕增生組織Ⅰ、Ⅲ型膠原和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1基因表達(dá)的影響及其抑制瘢痕增生的效果，為其進(jìn)一步應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。
　　 方法：采用健康日本大耳白兔10只，每只兔耳腹側(cè)制作6個(gè)方形創(chuàng)面，完整剝除全層皮膚及分離去除耳軟骨膜，保留耳軟骨，創(chuàng)面大小為1.0cm×1.0cm，間距1.0cm，共120個(gè)。傷后24天，取已形成的72個(gè)瘢痕增生樣組織塊隨機(jī)分為四組：A：生理鹽水組，B：潑尼松龍組，C：1.0

2、mg/ml Tet組，D：7.5mg/ml Tet組。在各組瘢痕增生組織基底部注射相應(yīng)溶液20ul，每3天一次，共10次。動(dòng)態(tài)觀察創(chuàng)面和瘢痕的形態(tài)學(xué)變化；蘇木精-伊紅染色(HE)和Masson染色分別觀察各組瘢痕成纖維細(xì)胞數(shù)量和膠原表達(dá)及排列變化；免疫組織化學(xué)染色及圖像分析觀察Ⅰ、Ⅲ型膠原和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1表達(dá)情況；RT-PCR及圖像分析檢測(cè)各組瘢痕組織Ⅰ、Ⅲ型膠原和TGF-β1及信號(hào)因子Smad3 mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果

3、：(1)傷后3-5天創(chuàng)面開(kāi)始結(jié)痂，6天完全結(jié)痂，15天大部分遠(yuǎn)端創(chuàng)面已愈合，傷后24天創(chuàng)面完全表皮化，形成突出皮面，質(zhì)地韌，暗紅色增生組織塊；HE、Masson染色顯示：瘢痕增生塊成纖維細(xì)胞數(shù)量及膠原面密度明顯高于正常皮膚，且膠原排列紊亂呈漩渦及結(jié)節(jié)狀。(2)與生理鹽水組比較，Tet組、潑尼松龍組瘢痕充血程度降低、顏色變淡、質(zhì)地變軟、厚度變薄，且Tet組形態(tài)學(xué)改善優(yōu)于潑尼松龍組，并以高濃度Tet組改善最明顯。(3)HE、Masson染色

4、顯示：Tet組、潑尼松龍組較鹽水組成纖維細(xì)胞數(shù)量明顯減少(P<0.01)，膠原面密度明顯降低(P<0.01)，排列更稀疏整齊，未見(jiàn)漩渦與結(jié)節(jié)，其中高濃度組成纖維細(xì)胞和膠原面密度降低最明顯。(4)免疫組織化學(xué)顯示：各組瘢痕組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原及TGF-β1均陽(yáng)性表達(dá)；生理鹽水組、潑尼松龍組、低濃度Tet組及高濃度Tet組Ⅰ、Ⅲ型膠原面密度及TGF-β1陽(yáng)性表達(dá)率依次降低(P<0.01)；另外Ⅰ、Ⅲ型膠原面密度比值也呈下降趨勢(shì)，從高到低依次為

5、生理鹽水組>低濃度Tet組>高濃度Tet組和潑尼松龍組。(5)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果示：各組瘢痕組織Ⅰ、Ⅲ型膠原和TGF-β1及信號(hào)分子Smad3 mRNA擴(kuò)增條帶亮度有明顯差異；與生理鹽水組比較，粉防己堿組、潑尼松龍組Ⅰ、Ⅲ型膠原和TGF-β1及Smad3mRNA表達(dá)減弱(P<0.01)；高濃度Tet組對(duì)Ⅰ型膠原和TGF-β1及Smad3 mRNA的表達(dá)減低最明顯。
　　 結(jié)論：Tet能明顯抑制兔耳瘢痕增生組織Ⅰ、Ⅲ型膠原和TG