hTERC基因在纖支鏡刷檢和宮頸液基細胞標本中的臨床診斷價值.pdf

1、目的：
　　 纖支鏡刷檢因簡便、快捷、經(jīng)濟、實用且準確性高而成為診斷肺癌的重要方法之一。然而，當癌細胞異型性不明顯或數(shù)量較少時，臨床上經(jīng)常出現(xiàn)高度可疑為肺癌，反復的細胞學檢查卻是陰性的結(jié)果。這可能是由于玻片中的癌細胞被大量的紅細胞、壞死碎屑和大量粘液所掩蓋。液基細胞學檢測系統(tǒng)（Liquid-based Cytological Test，LCT）通過祛除標本內(nèi)的粘液、雜質(zhì)及炎性細胞，制成視野清晰的薄層涂片，在宮頸細胞學診斷上已得到

2、了細胞學工作者的一致認可。
　　 目前宮頸癌的篩查方法多采用宮頸脫落細胞學檢查和HPV病毒檢測。盡管細胞學檢查大大降低了宮頸癌的發(fā)病率和死亡率，但由于細胞量有限降低了其敏感性，需要頻繁的隨訪調(diào)查；HPV檢測敏感性很高，但大部分HPV陽性病人會自動轉(zhuǎn)陰，僅少部分HPV陽性病變最終會發(fā)展到宮頸癌，限制了其在臨床使用的有效性。因此，建立科學、有效的診斷方法是提高肺癌和宮頸癌診斷陽性率的有效途徑，也是提高宮頸癌和肺癌患者生存率與治愈率的

3、關鍵。
　　 本課題以肺癌和宮頸癌為主攻對象，以宮頸和纖支鏡刷檢液基細胞學標本為檢測基礎，采用FISH方法測定癌前病變及癌細胞中hTERC基因的表達；探討hTERC基因的表達與細胞學及組織學診斷結(jié)果之間的關系，對診斷肺癌和宮頸癌的臨床應用價值。
　　 方法：
　　 收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2008年1月至2008年10月門診及住院肺癌患者術前纖維支氣管鏡刷檢標本204例。鱗癌104例，腺癌44例，小細胞癌56

4、例，以及肺良性疾病患者40例（包括炎癥20例和結(jié)核20例）。其中隨機選取102例用于FISH檢測。
　　 收集中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2008年3月至2008年10月宮頸液基細胞學標本123例。其中20例為無上皮內(nèi)病變及惡性病變，103例分別做了細胞學檢查及宮頸活檢。
　　 1、液基細胞學檢測
　　 （1）標本的處理，將刷檢標本用傳統(tǒng)涂片方法涂2張，巴氏染色。余下部分倒入含有CytoRich保存液的小瓶中，每一體

5、積氣管鏡刷檢標本加入CytoRich保存液；每10mL加入1mL粘液溶解液，混合后放置30min，震蕩器上震動10s，如混合液中仍有凝結(jié)，可再增加一些粘液溶解液，直至粘液溶解。
　　 （2）制片，將溶解后的標本倒入50mL的離心管中，按2000r/min離心10min，離心后去上清，加去離子水至7.5mL，重新震蕩混勻，按上述標準再離心5 min，棄上清，震蕩離心管，放在AutoCyte機器上制片、染色。
　　 2、熒光

6、原位雜交技術（Flurescence In Situ Hybridization，F(xiàn)ISH）檢測hTERC基因的擴增
　　 （1）收集液基瓶中的細胞制成玻片。
　　 （2）待測樣本與探針雜交。
　　 （3）熒光顯微鏡觀察并分析結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1、傳統(tǒng)細胞學涂片由于受粘液絲、炎性細胞及壞死細胞碎屑的干擾，204例肺癌中僅有118例發(fā)現(xiàn)了癌細胞，敏感度僅為 57.8％；而LCT法圖片背景干

7、凈、細胞圖像清晰，其敏感度達71.6％，兩者之間有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。但兩者聯(lián)合應用，其敏感度高達76.5％。與傳統(tǒng)細胞學相比，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　 2、hTERC基因擴增與病變程度有關（p<0.005）。肺癌患者hTERC基因擴增的百分比明顯高于非惡性病變的患者（p<0.005）；NSCLC患者hTERC基因擴增的百分比明顯高于SCLC患者（p<0.005）。
　　 3、102例支氣管刷檢中

8、，其中使用細胞學檢查發(fā)現(xiàn)84例敏感性為82.4％，而FISH檢測89人為陽性敏感性為87.3％，兩種方法無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。但在鱗癌診斷兩種方法有統(tǒng)計學差異（P<0.01）。
　　 4、hTERC基因擴增與病變程度有關（p<0.005）。細胞學分組中HSIL及SCC患者hTERC基因擴增的百分比明顯高于LSIL、ASC-US和NILM患者（p<0.005）；組織學分組中CIN Ⅲ及SCC患者hTERC基因擴增的百分比明

9、顯高于CIN Ⅱ及以下的患者（p<0.005）。
　　 5、各種異常雜交類型與細胞學結(jié)果有關（p<0.05）。在各類異常雜交類型中2-3類型所占的百分比最高，而特殊雜交類型與細胞學結(jié)果之間的相關性最大。
　　 結(jié)論：
　　 1、應用LCT法檢測小細胞肺癌敏感性優(yōu)于傳統(tǒng)涂片法，二者聯(lián)合檢查敏感性明顯優(yōu)于傳統(tǒng)涂片法。
　　 2、應用FISH檢測纖支鏡刷檢液基細胞標本中hTERC基因的表達有助于鑒別良惡性病變，