RAS抑制劑對鹽敏感性高血壓大鼠主動脈平滑肌細胞Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase及P38MAPK影響的實驗研究.pdf

1、本文分析了RAS抑制劑對鹽敏感性高血壓大鼠主動脈平滑肌細胞Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase及P38MAPK的影響。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：RAS抑制劑調節(jié)鹽敏感性高血壓大鼠主動脈平滑肌細胞Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性及基因表達的實驗研究。
　　目的：探討RAS抑制劑對鹽敏感性高血壓大鼠胸主動脈平滑肌細胞Na+/K+-ATPase、Ca2+-ATPase的活性和基因表達的

2、影響。
　　方法：選取18只新生雄性Wistar大鼠第1、2天分別注射辣椒辣素(50 mg/kg)，哺乳期后給予高鹽（4％NaCl）飲食一個月建立感覺神經損傷性鹽敏感性高血壓大鼠模型，隨機分成三組，每組6只，藥物干預并觀察鼠尾動脈收縮壓變化：替米沙坦組（10mg·kg-1·d–1）、雷米普利組（1 mg·kg-1·d–1）、模型組，另設一組空白對照組（n=6）。干預四周后，各組取胸主動脈進行平滑肌細胞培養(yǎng)，收集第4到6代細胞采用生

3、化酶學方法測定鈉泵（Na+/K+-ATPase）、鈣泵（Ca2+-ATPase）活性。RT-PCR檢測鹽敏感性高血壓大鼠胸主動脈平滑肌細胞膜鈉泵α1亞單位（Na+/K+-ATPaseα1-subunit）、鈣泵1型亞單位（plasma membrane calcium ATPase isoform1，PMCA1）mRNA的表達, Western-blot檢測Na+-K+-ATPaseα1-subunit、PMCA1蛋白的表達。
　

4、　結果：鹽敏感性高血壓模型組大鼠尾動脈收縮壓明顯高于空白對照組大鼠(P<0.05)，鹽敏感性高血壓大鼠經替米沙坦與雷米普利干預后血壓逐漸降低至正常水平。生化酶學結果顯示，模型組大鼠胸主動脈平滑肌細胞鈉泵、鈣泵活性低于空白組(P<0.05)，雷米普利組與替米沙坦組鈉泵、鈣泵活性高于模型組(P<0.05)。RT-PCR結果顯示，與空白組相比，模型組大鼠胸主動脈平滑肌細胞的Na+/K+-ATPaseα1-subunit、PMCA1的mRNA表

5、達降低(P<0.05)；經替米沙坦與雷米普利干預后Na+/K+-ATPaseα1-subunit、PMCA1的mRNA表達升高(P<0.05)。Western-Blot結果顯示，與空白組相比，模型組大鼠胸主動脈平滑肌細胞的Na+/K+-ATPaseα1-subunit蛋白表達減少(P<0.01)，PMCA1蛋白表達增加(P<0.01)；經替米沙坦與雷米普利干預Na+/K+-ATPaseα1-subunit蛋白表達增加(P<0.01)，P

6、MCA1蛋白表達減少(P<0.01)。
　　結論：替米沙坦與雷米普利干預后鹽敏感性高血壓大鼠胸主動脈平滑肌細胞鈉泵、鈣泵活性和mRNA的表達升高，推測鈉泵、鈣泵活性降低可能是鹽敏感性高血壓的發(fā)病機制之一。鹽敏感性高血壓大鼠胸主動脈平滑肌細胞Na+/K+-ATPase蛋白表達降低，而PMCA1表達增加，替米沙坦與雷米普利可逆轉這一現(xiàn)象，其機制可能與細胞內鈉鈣離子交換異常引起鈣泵蛋白代償增高有關。
　　第二部分：RAS抑制劑抑制

7、鹽敏感性高血壓大鼠主動脈平滑肌細胞p38 MAPK表達的實驗研究
　　目的：探討RAS抑制劑對鹽敏感性高血壓大鼠主動脈平滑肌細胞p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表達的影響及其機制。
　　方法：選取18只新生雄性Wistar大鼠第1、2天分別注射辣椒辣素(50 mg/kg)，哺乳期后給予高鹽（4%NaCl）飲食一個月建立感覺神經損傷性鹽敏感性高血壓大鼠模型，隨機分成三組,每組6只，干預并觀察鼠尾動脈收縮壓變化：替米

8、沙坦組（10mg·kg-1·d–1）、雷米普利組（1 mg·kg-1·d–1）、模型組，另設一組空白對照組6只。干預四周后，各組取胸主動脈進行平滑肌細胞培養(yǎng)，收集第4到6代細胞。RT-PCR檢測鹽敏感性高血壓大鼠胸主動脈平滑肌細胞膜p38MAPK、血管緊張素II1型受體（Angiotensin II type1 receptor，AT1R）mRNA的表達, Western-blot檢測磷酸化p38MAPK（p-p38 MAPK）、AT1

9、R蛋白的表達。
　　結果：鹽敏感性高血壓模型組大鼠尾動脈收縮壓明顯高于空白對照組大鼠(P<0.05)，鹽敏感性高血壓大鼠經替米沙坦與雷米普利干預后血壓逐漸降低至正常水平。RT-PCR結果顯示，與空白組相比，模型組動脈平滑肌細胞的p38MAPK、AT1R的mRNA表達升高(P<0.05)；與模型組相比，替米沙坦組與雷米普利組p38MAPK、AT1R的mRNA表達降低(P<0.05)；Western-Blot結果顯示，與空白組相比，模

10、型組大鼠胸主動脈平滑肌細胞的p-p38MAPK、AT1R蛋白表達升高(P<0.01)；與模型組相比，替米沙坦組與雷米普利組p-p38MAPK、AT1R蛋白表達降低(P<0.01)。
　　結論：⑴經辣椒辣素處理過的Wistar大鼠給予高鹽飲食可成功建立感覺神經損傷型鹽敏感性高血壓大鼠模型；⑵替米沙坦與雷米普利能降低鹽敏感性高血壓大鼠血壓至正常水平；⑶鹽敏感性高血壓大鼠胸主動脈平滑肌細胞p38MAPK、AT1R的mRNA表達升高，p-