泰山松花粉多糖對(duì)雞混合感染B亞型禽白血病病毒和禽波氏桿菌的免疫調(diào)理作用.pdf

1、禽胚胎性疾病是一類由多種病原引起的綜合性疾病，可造成雞胚發(fā)育受阻，孵化率降低，死亡率升高等，給養(yǎng)禽業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，其中以傳染性胚胎病危害最嚴(yán)重。禽波氏桿菌病(Bordetellosis)是最近幾年發(fā)現(xiàn)的一種禽的新型細(xì)菌性胚胎性疾病，它能引起雞胚和雛雞的急性死亡、孵化率降低(10％-40％)，及成年雞的眼炎等。而禽白血病(Avian Leukosis，AL)不但是一種重要的免疫抑制病，也是一種主要的病毒性胚胎性疫病。近幾年，養(yǎng)禽業(yè)中

2、多種病原混合感染的現(xiàn)象普遍存在，在胚胎性疾病中禽白血病病毒(ALV)和禽波氏桿菌(B.avium)混合感染的現(xiàn)象也越來越普遍。由于感染后癥狀、病變不典型，導(dǎo)致疾病的防控更加困難。由于動(dòng)物食品藥物殘留和食品安全問題的存在，所以開發(fā)和研究新型植物免疫增強(qiáng)劑勢(shì)在必行。本研究選擇泰山松花粉多糖(TPPPS)作為免疫增強(qiáng)劑用于B.avium和B亞型禽白血病病毒(ALV-B)的混合感染中，為控制免疫抑制性病毒與細(xì)菌的混合感染提供理論依據(jù)和技術(shù)支持，

3、為減少抗生素的使用，生產(chǎn)綠色安全的畜禽產(chǎn)品奠定良好的基礎(chǔ)。本研究內(nèi)容主要分為以下三部分:
　　1、雞胚胎性疫病病原的分離鑒定
　　2011年，遼寧鐵嶺某種雞孵化場出現(xiàn)孵化率降低、死淘率升高的現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)室通過細(xì)菌分離培養(yǎng)進(jìn)行菌落形態(tài)、培養(yǎng)特征、生化特性及血清學(xué)鑒定等對(duì)該孵化場送檢的病死雞胚和雛雞進(jìn)行了細(xì)菌學(xué)檢測。最終檢出B.avium、奇異變形桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和沙門氏菌，其中B.avium和奇異變形桿菌的檢出率分別高

4、達(dá)76.44％和61.36％，二者混合感染率為51.83％。本研究通過分子生物學(xué)檢測，采用病原菌23S rRNA基因的共同保守序列設(shè)計(jì)的一對(duì)引物，以及根據(jù)臨床常見致病菌16S-23S rRNA基因間隔序列(ISR)兩端的16S rRNA和23S rRNA保守序列設(shè)計(jì)的一對(duì)通用引物，分別對(duì)其中兩株分離率較高的菌株進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，并對(duì)其DNA序列進(jìn)行了測定。結(jié)果顯示，所得到的DNA片段與GenBank中收錄的登錄號(hào)為HM545299的B.

5、avium和登錄號(hào)為AY993943的奇異變形桿菌相應(yīng)核苷酸序列同源性分別高達(dá)99.5％和98.7％。另外，本研究通過ALVp27抗原檢測試劑盒對(duì)禽白血病病毒(ALV)進(jìn)行了檢測，ALV的檢出率為6.12％。本研究最終確定了B.avium與ALV的混合感染在養(yǎng)禽業(yè)中的存在，給養(yǎng)禽業(yè)造成了一定的經(jīng)濟(jì)損失。
　　2、TPPPS對(duì)ALV-B所致雞免疫抑制條件下混合感染B.avium的免疫調(diào)理作用
　　病毒（尤其是免疫抑制性病毒）和

6、B.avium的混合感染，在養(yǎng)禽業(yè)中已經(jīng)存在，造成的經(jīng)濟(jì)損失越來越嚴(yán)重，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。另外，由于藥物殘留和食品安全問題越來越嚴(yán)重，所以新型植物免疫增強(qiáng)劑的開發(fā)和研究勢(shì)在必行，正逐漸成為國內(nèi)外養(yǎng)禽業(yè)研究的新熱點(diǎn)。本研究中分別設(shè)計(jì)了ALV-B+B.avium組，ALV-B+B.avium+ TPPPS組，B.avium單獨(dú)感染組，B.avium+TPPPS組和試驗(yàn)對(duì)照組，對(duì)TPPPS的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了研究。相關(guān)指標(biāo)的檢測結(jié)果顯示

7、，ALV-B對(duì)抗體的產(chǎn)生、淋巴細(xì)胞比率、淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、IL-2和IFN-γ的合成和分泌等造成了明顯的抑制作用，并且延長了B.avium的病程，增強(qiáng)了其致病性。在TPPPS的免疫調(diào)理作用下，明顯緩解了ALV-B造成的免疫抑制，提高了雛雞的體液免疫和細(xì)胞免疫水平?？傊?，TPPPS對(duì)混合感染ALV-B和B.avium的雛雞發(fā)揮了免疫調(diào)理作用，增強(qiáng)了機(jī)體的免疫機(jī)能。通過本試驗(yàn)的研究，為TPPPS作為新型高效的免疫調(diào)節(jié)劑應(yīng)用于免疫抑制性病毒與細(xì)

8、菌混合感染的防治提供了理論依據(jù)。
　　3、TPPPS對(duì)胚胎期間混合感染ALV-B和B.avium雛雞的免疫調(diào)理作用
　　近些年雞胚混合感染免疫抑制性病毒和B.avium的現(xiàn)象逐年增加。由于藥物殘留和食品安全問題逐漸顯現(xiàn)，新型安全的免疫增強(qiáng)劑，尤其是植物多糖的研究已逐漸成為養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展中研究的熱門話題。本研究選擇300枚SPF雞胚，分別設(shè)計(jì)了ALV-B和B.avium混合感染組，B.avium單獨(dú)感染組，試驗(yàn)對(duì)照組。隨機(jī)抽取混合

9、感染后孵出的部分雛雞注射TPPPS作為免疫調(diào)理對(duì)象，并與單獨(dú)感染組進(jìn)行比較和分析。研究結(jié)果顯示混合感染組的各項(xiàng)檢測指標(biāo)均顯著低于B.avium單獨(dú)感染組。同時(shí)，B.avium的致病性增強(qiáng)，且病程延長。經(jīng)TPPPS調(diào)理后，提高了出殼前混合感染B.avium與ALV-B的病弱雛的存活率和雛雞質(zhì)量，促進(jìn)了機(jī)體的生長和免疫器官的發(fā)育，提高了病弱雛的存活率和對(duì)疾病的抵抗力。因此，考慮到在免疫機(jī)能和生產(chǎn)性能方面的積極作用，發(fā)現(xiàn)TPPPS能夠作為免疫