青錢(qián)柳細(xì)胞懸浮體系的建立及其三萜類化合物的代謝調(diào)控.pdf

1、青錢(qián)柳(Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja)是我國(guó)特有的珍稀單種屬植物，也是國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)的瀕危植物之一。含有多種生物活性物質(zhì)，如三萜類等，但由于現(xiàn)有的青錢(qián)柳資源主要是天然林，不僅數(shù)量少，多零星分布于深山老林和一些自然保護(hù)區(qū)中，而且青錢(qián)柳在自然環(huán)境下生長(zhǎng)緩慢，加上人工過(guò)度采集，導(dǎo)致其自然資源已瀕臨滅絕。研究利用細(xì)胞培養(yǎng)得到其有效成分是青錢(qián)柳資源開(kāi)發(fā)利用的新途徑。
　　 本研究系統(tǒng)論述了青錢(qián)柳

2、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)，通過(guò)多次繼代培養(yǎng)后取疏松的愈傷組織進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，優(yōu)化了培養(yǎng)條件并最終建立懸浮細(xì)胞系。同時(shí)探討了理化因子對(duì)懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)及總?cè)坪康挠绊憽Ｖ饕芯拷Y(jié)果如下：
　　 1、采用超聲波浸提法從青錢(qián)柳愈傷組織中提取總?cè)?，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)考察了不同提取劑、提取劑用量、超聲功率、提取溫度、提取時(shí)間對(duì)青錢(qián)柳三萜化合物提取的影響。并應(yīng)用正交實(shí)驗(yàn)確定最佳工藝參數(shù)。結(jié)果表明，提取的最佳工藝為：以乙酸乙酯為提取溶劑，固液比1:10，超

3、聲功率60W，震蕩45min，提取次數(shù)1次。此時(shí)得率為2.45％。
　　 2、以青錢(qián)柳葉愈傷組織建立青錢(qián)柳細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系，測(cè)定了細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的生長(zhǎng)曲線，并研究了培養(yǎng)代數(shù)、接種量、裝液量、pn值和激素組合對(duì)青錢(qián)柳細(xì)胞懸浮體系建立的影響。結(jié)果表明：適合青錢(qián)柳懸浮培養(yǎng)的培養(yǎng)基為：MS+0.1 mg/L2，4-D+0.5mg/L NA.A+1 mg/L KT+40 g/L蔗糖，接種量為8％，搖瓶裝液量的體積分?jǐn)?shù)為40％，初始pH值為5

4、.0。在一個(gè)培養(yǎng)周期內(nèi)，懸浮培養(yǎng)的青錢(qián)柳細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線呈“S”型，第10天干重和三萜總產(chǎn)量都達(dá)到了最高值，分別為18.70 g/L和1.25 g/L。
　　 3、研究了五種營(yíng)養(yǎng)因子即碳源、氮源、肌醇、Ca2+和水解酪蛋白對(duì)青錢(qián)柳細(xì)胞生長(zhǎng)及總?cè)菩纬傻挠绊憽?％的蔗糖是最合適的碳源；懸浮細(xì)胞在MS培養(yǎng)基下，氮源總量和比例不變時(shí)，青錢(qián)柳三萜的產(chǎn)量最高；肌醇對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和三萜產(chǎn)量的促進(jìn)效果不大；鈣鹽和水解酪蛋白對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和總?cè)菩纬傻挠?/p>