油茶炭疽拮抗內生細菌的篩選、發(fā)酵及抑菌機理研究.pdf

1、油茶炭疽病(Camellia oleifera anthracnose)是我國油茶產區(qū)的主要病害之一,由膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起。該病常引起落果、落蕾,落果率一般在20％～40％,嚴重時達60％以上,降低了油茶產量。當前對油茶炭疽病的防治主要通過種植抗性品種和化學防治來控制,但易引發(fā)病原菌抗藥性、環(huán)境污染等,效果不理想。安全、高效的無公害生物防治受到人們的廣泛關注。本研究從油茶健康葉

2、子中分離篩選出對油茶炭疽病病菌有抑制作刖的拮抗菌,然后對防治效果好的生防菌株進行發(fā)酵條件優(yōu)化及抑菌機理研究,研究結果如下:
　　 (1)油茶炭疽病拮抗內生細菌的篩選與鑒定。從油茶健康植株分離到內生細菌156株。通過平板對峙和液體發(fā)酵離體初篩試驗,得到對油茶炭疽病菌有抑制作用的菌株9株,抑制率均達到75％以上。進一步通過盆栽活體復篩,篩到一株強烈抑制油茶炭疽病的拮抗菌株Y13,中南林業(yè)科技大學菌種保藏號為CSUFT B0013。結

3、合菌落形態(tài)、生理生化特征及16S rDNA序列分析,內生拮抗菌Y13鑒定是枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis。
　　 (2)油茶炭疽病拮抗內生細菌 Y13的發(fā)酵條件優(yōu)化。單因子試驗表明:拮抗菌Y13最佳培養(yǎng)基為NYBD培養(yǎng)基,最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是牛肉膏和酵母膏；在溫度30℃,初始 pH7.0,搖瓶裝液量為50mL,接種量7％,搖床轉速140 r/min,發(fā)酵周期72h的條件下可獲得最大抑菌活性。正交試驗表明:

4、Y13菌株獲得最大抑菌活性的培養(yǎng)基為葡萄糖25g,酵母膏10g,牛肉膏5g,NaCl濃度為1.2％。菌株獲得最大生長量的培養(yǎng)基為葡萄糖15g,酵母膏10g,牛肉膏3g,NaCl濃度為1.5％。
　　 (3)油茶炭疽病拮抗內生細菌Y13的抑菌機理研究。拮抗菌Y13連續(xù)轉接10次,均具有明顯的抗菌作用,拮抗作用比較穩(wěn)定。Y13能夠抑制油茶炭疽病菌菌絲體的生長和分生孢子的萌發(fā)。同時,Y13對植物病原真菌有較廣的抑菌譜,對油茶葉枯病菌、