油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌成分及結構鑒定.pdf

1、油茶（Camellia oleifera）是我國重要的油料作物，茶油中的不飽和脂肪酸、茶多糖和微量物質能預防人體多種疾病，具有很高的經濟價值。隨著油茶產業(yè)的不斷發(fā)展，油茶病蟲害日趨嚴重，其中油茶炭疽病（Camellia oleifera anthracnose）是油茶產區(qū)的主要病害之一，嚴重影響了油茶的產量與質量。當前化學農藥的泛濫使用，造成環(huán)境污染、農藥殘留、生態(tài)破壞和茶油品質下降等一系列問題，因此，油茶病蟲害的高效、安全、綠色生物防

2、控成為當前研究熱點。
　　本實驗室篩選出一株對油茶炭疽病有很強抑制作用的油茶拮抗放線菌CF17，為了更好的為生防菌株CF17林間應用提供奠定理論基礎，本論文主要以放線菌CF17發(fā)酵液為研究對象，研究了其抑菌譜，并采用丙酮沉淀法、SPE固相萃取法、高效液相色譜法和質譜法對油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質進行分離純化及鑒定。研究主要結果如下:
　　(1)油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質分離。放線菌CF17進行液體發(fā)酵得到

3、CF17發(fā)酵液，對發(fā)酵液進行抑菌譜測定發(fā)現(xiàn)，放線菌CF17對炭疽屬病原菌抑菌率達到90％以上，具有用于生物農藥開發(fā)的前景。對CF17無菌發(fā)酵液通過乙醇沉淀法、乙酸乙酯沉淀法、丙酮沉淀法進行抑菌物質活性對比，篩選出丙酮沉淀方法為最佳提取方法。通過設置30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％不同丙酮濃度提取發(fā)酵液進行抑菌實驗，篩選出50％的丙酮濃度為最佳提取濃度，其抑菌圈達到19.50mm，并能很好的分離發(fā)酵液中的雜質。

4、>　　(2)油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質純化。對CF17抑菌粗提物進行固相萃取分離純化，以乙腈為洗脫液，設置0％、10％、60％、100％不同濃度的乙腈洗脫萃取柱，經過抑菌實驗結果表明CF17抑菌物質全部存在于60％的洗脫液中。對經固相萃取后的抑菌物質進行半制備高效液相色譜純化，按時間段收集到11個組分，抑菌實驗結果表明僅只有6號(25～30min)組分能產生明顯抑菌圈;根據液相色譜峰強度收集到23個組分并進行抑菌實驗，結果表明

5、僅15號組分色譜峰保留時間27.21min處能產生明顯抑菌圈，抑菌圈大小為19.55mm，與分時間段收集組分抑菌實驗相符。優(yōu)化后的色譜條件分析色譜峰保留時間17.21min處組分，結果表明17.21min處組分主要存在兩種抑菌物質，分別為保留時間32.58min處抑菌物質與保留時間37.51min處抑菌物質，且色譜峰純度達到質譜檢測要求。
　　(3)油茶炭疽病拮抗放線菌CF17抑菌物質鑒定。通過離子阱質譜對放線菌CF17抑菌物質進

6、行結構解析，通過一級二級質譜進行分析，并通過與質譜數據庫比對，鑒定CF17抑菌物質結構。保留時間32.58min處抑菌物質通過離子阱質譜推斷為Tetrin B，分子式為C34H51NO14;保留時間37.51 min處抑菌物質為TetramycinA，分子式為C35H53NO13。放線菌CF17所產生抑菌物質是一類四烯大環(huán)內酯類的抗生素，它不僅對大多數真菌性病害有抑制作用，而且能通過提高植株生長素與防御酶活性，促進植株生長，提升植株抗病