煙草青枯菌拮抗放線菌的篩選、鑒定及發(fā)酵條件研究.pdf

1、煙草青枯病是由茄勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一種細菌性病害，在國內的廣東、福建等南方地區(qū)普遍發(fā)生。近幾年來，該病的發(fā)生和危害范圍有向北方煙區(qū)擴展的趨勢，在山東、河南及陜西等省均有發(fā)生，局部地區(qū)為害較重，已成為煙草主要病害之一。傳統(tǒng)的化學防治方法不僅成本高、污染重、破壞土壤生態(tài)，而且造成農(nóng)產(chǎn)品有害物質殘留超標。因此，進一步篩選對青枯病有較理想防治效果的生防菌株，對于煙草生產(chǎn)及生態(tài)環(huán)境等各方面均有著十分重要

2、的意義。本研究針對煙草青枯病菌，主要進行了拮抗放線菌的篩選、鑒定、發(fā)酵條件優(yōu)化、發(fā)酵產(chǎn)物的穩(wěn)定性及促生作用的研究。主要研究結果如下： 1.采用稀釋平板法從土壤中分離到87株放線菌。采用平板對峙法和瓊脂擴散法相結合的方法對其進行初步篩選和再次篩選，獲得了對煙草青枯病菌拮抗活性較強的3個放線菌菌株。其中來源于臨沂蒙陰縣土樣的Y23菌株發(fā)酵液對煙草青枯病菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑為13.4mm。Y23菌株除對煙草青枯病菌具有很強的拮

3、抗活性外，還對多種煙草病原真菌，如煙草根黑腐病菌(Thielaviopsis basicola)、煙草炭疽病菌(Colletotrichum nicotianae)、煙草赤星病菌(Alternaria alternate)等都表現(xiàn)出不同程度的抑菌活性。 2.對Y23菌株的形態(tài)和培養(yǎng)特征觀察、生理生化特性分析、細胞壁組分測定及16S rRNA序列分析結果表明：該菌基內菌絲無橫隔、不斷裂、氣生菌絲多分枝，孢子短桿狀，表面光滑；細胞壁

4、化學組分I型，糖型C型，表明該菌株屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)；同時，在以16SrRNA序列為基礎構建的系統(tǒng)發(fā)育樹中，Y23菌株與9株典型鏈霉菌聚成一支，其同源性為97.9～99.3％，其中Y23菌株的16S rRNA序列與S.lavendulae的同源性最高，其同源性為99.3％，但該菌株與S. lavendulae的形態(tài)特征和生理生化特性方面存在一定的差異。因此，將Y23菌株的分類地位初步確定為薰衣草鏈霉菌(Strept

5、omyceslavendulae)。 3.初步研究了Y23菌株的發(fā)酵條件，確定了最佳培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件。單因素發(fā)酵試驗和正交試驗表明：碳源以1％可溶性淀粉最佳，氮源以0.4％酵母粉最好，無機鹽以0.025％磷酸氫二鉀為最佳，種子液菌齡36 h，接種量6％，發(fā)酵時間96 h，培養(yǎng)基初始pH 7.0，裝液量為50 mL/250 mL三角瓶，發(fā)酵溫度26℃，搖床轉速200 r/min。這些結果對在生產(chǎn)實際中菌株的應用、抗生素的分離純