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文檔簡介
1、氯酚類化合物是一類由氯原子取代苯環(huán)上氫原子的芳香族化合物。根據(jù)苯環(huán)上被取代氫原子的數(shù)目,氯酚可被分為一氯酚(Monochlorophenol)、二氯酚(Dichlorophen。DCP)、三氯酚(Trichlorophenol。TCP)、四氯酚(Tetrachlorophenol。TeCP)、五氯酚(Pentachlorophenol。PCP)。氯酚極易溶于二甲基亞砜和苯等有機(jī)溶劑,難溶或者微溶于水,且其溶水性會(huì)隨著苯環(huán)上氯原子的增多而
2、降低。現(xiàn)在被廣泛用于殺蟲劑、防真菌劑、除草劑和防腐劑等。因此,在環(huán)境中氯酚類物質(zhì)極易通過生物鏈的傳遞進(jìn)入人體。目前,多個(gè)國家已經(jīng)將多種氯酚列入污染物優(yōu)先控制名單。氯酚類化合物的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,一旦進(jìn)入環(huán)境,很難被降解,屬于持久性有機(jī)環(huán)境污染物。其中,2,4,6-三氯酚是一種毒性較強(qiáng)的氯酚,被世界衛(wèi)生組織定義為致癌物質(zhì)。由于其分布的廣泛性與其難降解的特點(diǎn),因此關(guān)于其危害的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本研究探討的是2,4,6-三氯酚處理小鼠成纖維細(xì)胞
3、后,對其造成的影響,為預(yù)防其毒性提供一定的借鑒和參考。
本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下:
1.經(jīng)過2,4,6-三氯酚處理12 h的小鼠成纖維細(xì)胞(Murine Fibroblast Cell。MEF)的細(xì)胞活力會(huì)降低并且細(xì)胞形狀會(huì)改變。0.25、0.5、0.75、1.0 mM的2,4,6-三氯酚處理后,隨著濃度的升高,細(xì)胞活力呈遞減現(xiàn)象,并且1.0 mM的2,4,6-三氯酚處理細(xì)胞后會(huì)明顯改變細(xì)胞的形狀。
2.被處理過
4、的小鼠成纖維細(xì)胞會(huì)發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)。細(xì)胞經(jīng)處理1 h后。ROS達(dá)到一個(gè)爆發(fā)點(diǎn),1~2 h,ROS降到最低,2~4 h時(shí),ROS達(dá)到第二次爆發(fā)水平,之后ROS的水平下降。本研究選取了兩個(gè)指標(biāo)來檢測ROS水平,分別是Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA的水平,HO-1 mRNA和Nfr-2 mRNA的水平在經(jīng)過2,4,6-三氯酚的處理后會(huì)增加,且隨著2,4,6-三氯酚濃度的增加而增加的同時(shí)發(fā)現(xiàn)經(jīng)過處理后的細(xì)胞其Nrf2蛋白焦點(diǎn)會(huì)增加。
5、r> 3.經(jīng)2,4,6-三氯酚處理過的小鼠成纖維細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑。細(xì)胞經(jīng)過2,4,6-三氯酚處理12 h后,IRE1α,Bip和剪接型的XBP1 RNA表達(dá)量會(huì)明顯升高。全長型的XBP1會(huì)隨著濃度的升高轉(zhuǎn)換成剪接型的比值也會(huì)增加。為了進(jìn)一步證實(shí)2,4,6-三氯酚會(huì)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生,本研究檢測了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志蛋白Bip和CHOP,可以看到其表達(dá)量都會(huì)隨著2,4,6-三氯酚濃度的增加而升高。同時(shí)磷酸化的eIF2α在濃度為0.
6、5和0.75 mM時(shí)達(dá)到最大值。
4.細(xì)胞在經(jīng)過2,4,6-三氯酚的藥物暴露后會(huì)發(fā)生凋亡。細(xì)胞經(jīng)過2,4,6-三氯酚暴露后,利用流式細(xì)胞術(shù)對細(xì)胞的凋亡作了定量分析。細(xì)胞凋亡的比例隨著2,4,6-三氯酚濃度的增加而增加。與此同時(shí)本研究也檢測了反應(yīng)凋亡的其他指標(biāo)。經(jīng)過處理的細(xì)胞,其caspase的活性隨著時(shí)間的延長而增加,并且在12 h處達(dá)到最高。檢測了線粒體的膜電位,線粒體膜電位是反應(yīng)凋亡的一個(gè)重要指標(biāo),可以發(fā)現(xiàn)在濃度為1.0
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