外源線(xiàn)粒體對(duì)對(duì)乙酰氨基酚損傷的肝細(xì)胞的保護(hù)作用研究.pdf

1、對(duì)乙酰氨基酚（APAP）是一種廣泛使用的解熱鎮(zhèn)痛藥。治療劑量的APAP療效明確，用藥安全。但過(guò)量服用APAP可以引起嚴(yán)重的肝損傷，表現(xiàn)為肝細(xì)胞壞死。APAP引起肝細(xì)胞損傷的重要靶標(biāo)是線(xiàn)粒體。APAP所致肝細(xì)胞毒性可能是通過(guò)干擾細(xì)胞線(xiàn)粒體的生物合成破壞線(xiàn)粒體結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而破壞肝細(xì)胞的功能。盡管乙酰半胱氨酸是臨床上治療 APAP中毒的標(biāo)準(zhǔn)藥物，但其給藥方式、劑量、時(shí)間仍存在爭(zhēng)議。因此，尋找減輕APAP肝毒性的途徑非常重要。本文中我們以構(gòu)建

2、了APAP致肝損傷的細(xì)胞模型，研究外源線(xiàn)粒體對(duì)APAP損傷的細(xì)胞的影響。
　　本研究構(gòu)建了線(xiàn)粒體可以表達(dá)綠色熒光蛋白的HepG2細(xì)胞，并從此細(xì)胞中提取綠色熒光線(xiàn)粒體，同時(shí)采用線(xiàn)粒體特異性的紅色熒光染料（MitoTracker Red CMXRos）對(duì)正常的HepG2細(xì)胞中提取的線(xiàn)粒體進(jìn)行染色，獲得紅色熒光線(xiàn)粒體。將制備好的熒光線(xiàn)粒體與HepG2細(xì)胞共孵育后，實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞攝取線(xiàn)粒體的情況，結(jié)果顯示細(xì)胞在10 min內(nèi)可以攝取外源線(xiàn)粒

3、體。然后用巨胞飲抑制劑—鹽酸阿米洛利、網(wǎng)格蛋白抑制劑—高滲蔗糖溶液預(yù)處理細(xì)胞30 min后，測(cè)定細(xì)胞對(duì)外源線(xiàn)粒體的攝取率，結(jié)果顯示當(dāng)鹽酸阿米洛利預(yù)處理細(xì)胞后，攝取率顯著降低。此外，我們用詹姆斯綠 B對(duì)小鼠肝臟線(xiàn)粒體染色，并測(cè)定其直徑、膜通透性及腫脹度。激光粒度儀測(cè)定結(jié)果顯示，我們提取的線(xiàn)粒體的直徑主要分布在531.2?955.4 nm之間，線(xiàn)粒體腫脹度檢測(cè)結(jié)果顯示，線(xiàn)粒體溶液540 nm的吸光度較穩(wěn)定，線(xiàn)粒體的膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。最后，我們確定

4、APAP合適的作用濃度為10 mM、損傷時(shí)間為24 h，成功建立APAP致肝損傷的細(xì)胞模型，并初步探討小鼠肝臟線(xiàn)粒體對(duì)APAP損傷的細(xì)胞的保護(hù)作用。將細(xì)胞分為3組，分別為正常對(duì)照組、模型組和外源線(xiàn)粒體保護(hù)組。我們檢測(cè)了3組細(xì)胞的凋亡率、細(xì)胞培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、細(xì)胞中谷胱甘肽（GSH）、三磷酸腺苷（ATP）的含量、線(xiàn)粒體形態(tài)和膜電位的變化。檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞的凋亡率增加；細(xì)胞培養(yǎng)液中