四個(gè)STR基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的研究及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用.pdf

1、目的:本課題旨在建立已有群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)的STR基因座D11S4952、D7S3062、GATA168F06和D10S1426基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系。按照美國(guó)DNA分析方法技術(shù)工作組(The Technology Working Group onDNA Analysis Methods，TWGDAM)的指導(dǎo)方案進(jìn)行法醫(yī)學(xué)實(shí)用性研究。 方法:首先對(duì)多個(gè)本實(shí)驗(yàn)室做過(guò)群體遺傳學(xué)研究的STR基因座進(jìn)行篩選，從中獲得四個(gè)多態(tài)性好、個(gè)人

2、識(shí)別機(jī)率高，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度片段有區(qū)別的四個(gè)STR基因座，即D11S4951、D7S3062、GATA168F06、D10S1426，利用傳統(tǒng)的復(fù)合擴(kuò)增方法，ABI-310毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增的研究。并對(duì)復(fù)合擴(kuò)增體系的靈敏度和準(zhǔn)確度，不同擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)和熱啟動(dòng)下復(fù)合擴(kuò)增的效果等進(jìn)行了研究。按照TWGDAM指導(dǎo)方案的基本要求，對(duì)該體系進(jìn)行了法醫(yī)學(xué)實(shí)用性研究，包括基因座的種屬特異性，組織同一性及可重復(fù)性。 結(jié)果:成功建立了D1

3、1S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系。而且，這一擴(kuò)增體系條件易于優(yōu)化，采用國(guó)產(chǎn)Taq酶，不需要熱啟動(dòng)進(jìn)行擴(kuò)增，即可得到滿(mǎn)意的擴(kuò)增產(chǎn)物和分型結(jié)果。相對(duì)于國(guó)外昂貴的試劑盒，是一種成本低廉但效率高的STR基因座復(fù)合擴(kuò)增體系。法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究表明，該體系的檢測(cè)靈敏度為0.25ng模板DNA，四個(gè)STR基因座具有較高的種屬特異性，對(duì)同一個(gè)體的不同組織檢測(cè)結(jié)果一致，對(duì)常見(jiàn)基質(zhì)上的檢材及混合樣本具

4、有檢測(cè)能力。對(duì)15個(gè)實(shí)際檢案樣本的檢測(cè)證明，該體系能用于法醫(yī)學(xué)個(gè)人識(shí)別和親權(quán)鑒定。 結(jié)論:D11S4951、D7S3062、GATA168F06和D10S1426的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系可應(yīng)用ABI-310檢測(cè)平臺(tái)，獲得可靠的分型結(jié)果。法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究證明，該體系擴(kuò)增條件易于優(yōu)化、成本低廉、分型結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度和準(zhǔn)確度高，種屬特異性好，重復(fù)性好，對(duì)陳舊斑痕具有檢測(cè)能力，能夠?qū)ΤＲ?jiàn)基質(zhì)上的斑痕以及混合斑痕正確分型，與常見(jiàn)的動(dòng)物及微生