3個基因座復(fù)合擴增體系的構(gòu)建及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究.pdf

1、當(dāng)一個刑事案件或治安案件發(fā)生時，在法醫(yī)物證檢驗中常染色體STR和Y染色體STR通常是分開兩次檢驗的。然而，現(xiàn)有的STR分型技術(shù)因受到物證檢材的狀態(tài)、STR基因座復(fù)合擴增的個數(shù)、擴增體系耐受能力的大小等因素的影響，常染色體和Y染色體分開檢驗的常規(guī)方式因為對檢測時間、模板狀態(tài)等因素的硬性要求導(dǎo)致不能快速高效全面的提供DNA線索，從而可能導(dǎo)致失去有效偵查的最佳機會。此外，復(fù)雜的犯罪現(xiàn)場環(huán)境如高溫、潮濕、微生物等因素可導(dǎo)致收集的現(xiàn)場物證常出現(xiàn)D

2、NA降解、多個個體DNA混合、DNA極其微量等情況，使得常規(guī)檢驗不能獲得良好的分型結(jié)果。現(xiàn)有的檢測體系已無法滿足日益增加的刑事案件對于法醫(yī)DNA快速現(xiàn)場檢驗的要求，因此研發(fā)同時檢測常染色體STR和Y染色體STR的復(fù)合擴增體系，是目前法醫(yī)DNA檢案的一種迫切需求。
　　目的:
　　構(gòu)建18個常染色體STR、14個Y-STR和性別鑒定Amelogenin等33個基因座的熒光復(fù)合擴增體系，并對該體系進行系統(tǒng)效能驗證和法醫(yī)學(xué)參數(shù)評估

3、，以期為法醫(yī)物證檢驗提供一種更高通量、更穩(wěn)定可靠的STR復(fù)合擴增和檢測系統(tǒng)，從而滿足公安系統(tǒng)實際檢案中對于微量DNA、降解DNA、混合DNA等疑難檢材的檢測需求。
　　方法:
　　本研究利用高效的熱啟動Taq DNA聚合酶、多重復(fù)合擴增及六色熒光檢測技術(shù)，在18個常染色體STR和1個性別鑒定基因座Amelogenin的基礎(chǔ)上，加入14個Y-STR基因座，引入mini-STR引物設(shè)計，優(yōu)化復(fù)合擴增反應(yīng)體系和PCR反應(yīng)程序，構(gòu)建

4、了33個基因座的熒光復(fù)合擴增體系，并對該體系進行系統(tǒng)效能驗證和法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值評估。
　　結(jié)果與結(jié)論:
　　本研究成功構(gòu)建了33個基因座的熒光復(fù)合擴增體系。該體系包含有13個mini-STR，靈敏度高，特異性好，重復(fù)性高，分型準(zhǔn)確。該體系在廣東漢族、廣西壯族、廣西瑤族和廣西仡佬族四個群體中的累計匹配概率(CMP)分別為2.39×10-29、1.16×10-28、5.05×10-26和2.09×10-28，可為法醫(yī)學(xué)應(yīng)用提供可靠

5、、穩(wěn)定和高信息量的技術(shù)保障，特別是為公安系統(tǒng)微量、降解、混合等疑難現(xiàn)場檢材DNA檢驗提供了一種新的高效的技術(shù)手段。
　　意義:
　　1、在一個反應(yīng)體系中將常染色體STR和Y染色體STR兩種遺傳標(biāo)記同時檢測，可提高檢驗通量、減少檢驗時間和降低檢驗成本;
　　2、在一個反應(yīng)體系中同時檢測常染色體STR基因座及更多高多態(tài)性的Y染色體STR基因座，既能根據(jù)Y染色體基因座信息進行嫌疑人的快速排查，又能根據(jù)常染色體基因座信息鎖定嫌

6、疑人;
　　3、通過在常染色體STR基因座復(fù)合擴增體系加入14個Y-STR基因座，可更好的解決現(xiàn)場案件檢材中混合樣本的男性成分來源個體數(shù)量及分型問題;
　　4、在反應(yīng)體系中加入的Y-STR基因座可以很好的解決Amelogenin-Y等位基因缺失而造成的性別錯判問題;
　　5、通過引入mini-STR引物設(shè)計，并對PCR反應(yīng)體系進行優(yōu)化，可以提高熒光復(fù)合擴增體系的靈敏度以及對降解檢材的檢出成功率;
　　6、該體系系