AKT和p-AKT在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達及預后意義.pdf

1、目的：
　　乳腺癌是全世界女性最常見的惡性腫瘤。我國女性的乳腺癌發(fā)病率雖然低于全球水平，但發(fā)病率逐年迅猛增長，位列我國女性惡性腫瘤死亡原因第二位。
　　PI3K-AKT信號通路的異?；罨诎┌Y中被發(fā)現超過20年。PI3K-AKT信號通路對于細胞周期、增殖、生長、生存、蛋白質合成和葡萄糖代謝至關重要。AKT位于PI3K的下游，p-AKT為AKT的活化形式。當AKT活化后，可以磷酸化其下游的許多底物，包括：mTOR、GSK-3、

2、p21WAF1和p27Kip1、FoxO轉錄因子、Bcl-2、MDM2等，從而發(fā)揮其促進細胞增殖、生長和抗凋亡的作用。通過對醫(yī)學數據庫的檢索發(fā)現：PI3K-AKT信號通路在廣泛腫瘤譜中發(fā)生變異，但在臨床病理學角度（整體水平）對AKT及p-AKT在乳腺癌組織中的表達水平存在一定的爭議。大多研究認為：AKT、p-AKT在乳腺癌組織中的表達水平與乳腺癌的臨床分期、組織學分級具有相關性。然而，鮮有關于AKT、p-AKT與乳腺癌預后相關的報道。此

3、外，馬力教授等[1]通過對轉染了細胞增殖抑制基因（Mfn2）的乳腺癌細胞MCF-7研究，發(fā)現Mfn2通過下調PI3K-AKT信號通路促進細胞凋亡和抑制細胞增殖。檢索相關文獻資料未見關于乳腺癌組織中Mfn2與AKT、p-AKT表達水平是否相關的報道。
　　本研究通過采用免疫組化Max Vision TM一步法，檢測乳腺正常導管上皮組織及乳腺原發(fā)性浸潤性導管癌組織中AKT、p-AKT的表達情況。探討AKT、p-AKT的表達情況與乳腺浸

4、潤性導管癌患者臨床病理特征及預后的關系，并探究乳腺浸潤性導管癌組織中Mfn2與AKT、p-AKT的表達情況是否存在相關性，進一步揭示Mfn2基因及PI3K-AKT信號通路在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，從整體水平初步印證我們的前期工作。
　　方法：
　　1.隨機連續(xù)收集河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院乳腺中心2008年接受手術治療的原發(fā)性乳腺浸潤性導管癌石蠟包埋組織126例（均有完整隨訪和臨床病理資料）作為研究對象，以病理證實的正常乳腺導

5、管上皮組織10例作為對照組。于我院病理科采用免疫組化Max Vision TM一步法檢測所有患者病理組織的AKT、p-AKT、Mfn2表達情況，并按照病理學標準復診原有病理切片。
　　2.將AKT、p-AKT在乳腺浸潤性導管癌中的表達情況與患者年齡、術后的腫瘤直徑、淋巴結轉移數目、術后TNM臨床分期、組織學分級、是否存在脈管瘤栓、分子分型、ER、PR、HER2、Ki-67的表達情況以及DFS、OS等隨訪結果相結合探討AKT、p-A

6、KT的表達情況與乳腺癌患者臨床病理特征及預后的關系。
　　3.觀察乳腺浸潤性導管癌組織中Mfn2與 AKT、p-AKT的表達情況是否存在相關性。
　　4.應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。AKT、p-AKT表達情況與臨床病理特征結果采用卡方檢驗及Spearman相關性檢驗。AKT、p-AKT表達情況與預后關系應用Kaplan-Meier生存曲線進行單因素生存分析，COX回歸模型進行

7、多因素生存分析。
　　結果：
　　1.在126例乳腺浸潤性導管癌組織標本中，p-AKT陰性者共54例（54/126，42.9％），p-AKT陽性者共72例（72/126，57.1%）。AKT陰性者共26例（26/126，20.6%），AKT陽性者共100例（100/126，79.4%）。在10例正常乳腺導管上皮組織標本中，p-AKT陰性者共9例（9/10，90%），p-AKT陽性者共1例（1/10，10%）。AKT陰性者共5

8、例（5/10，50%），AKT陽性者共5例（5/10，50%）。p-AKT在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達率高于正常乳腺導管上皮組織標本（57.1%vs10%），χ2=6.493，P=0.011，差異具有統(tǒng)計學意義。AKT在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達率雖高于正常乳腺導管上皮組織標本（79.4%vs50%），χ2=3.024，P=0.082，但差異無統(tǒng)計學意義。
　　2.根據術后病理標本的腫瘤大小，將126例患者分為：≤2c

9、m組，共54例（54/126，42.9%）；＞2cm且≤5cm組，共62例（62/126，49.2%）；＞5cm組，共10例（10/126，7.9%）。三組的p-AKT陽性率分別為44.4%，62.9%，90.0%。進行卡方檢驗，結果示χ2=8.804， P=0.012，差異有統(tǒng)計學意義。進行Spearman相關性分析，r=0.254，P=0.004。提示原發(fā)腫瘤直徑與p-AKT的表達呈正相關。
　　3.根據術后石蠟標本淋巴結轉移

10、個數，將126例患者分為：N0（無淋巴結轉移）組，共57例（57/126，45.2%）；N1（淋巴結轉移1~3枚）組，共26例（26/126，20.6%）；N2（淋巴結轉移4~9枚）組，共25例（25/126，19.9%）；N3（淋巴結轉移≥10枚）組，共18例（18/126，14.3%）。四組的p-AKT陽性率分別為：42.1%，50.0%，80.0%，83.3%。通過卡方檢驗對四組進行比較，χ2=16.180，P=0.001，差異有

11、統(tǒng)計學意義。進行Spearman相關性分析，r=0.338，P＜0.001。提示淋巴結轉移數目與p-AKT的表達呈正相關。
　　4.根據術后TNM臨床分期，將126例乳腺癌分為：Ⅰ期患者32例（32/126，25.4%），Ⅱ期患者55例,（55/126，43.7%），Ⅲ期患者39例（39/126，30.9%）。三組的p-AKT陽性率分別為40.6%，47.3%，84.6%。應用卡方進行分析，χ2=17.772，P＜0.001，差異

12、有統(tǒng)計學意義。Spearman相關性分析結果示：r=0.347，P＜0.001。提示術后TNM臨床分期與p-AKT的表達呈正相關。
　　5根據術后病理診斷中的組織學分級，將126例患者分為3組，分別是Ⅰ級組，共0例（0/126，0%）；Ⅱ級組，共103例（103/126，81.7%），其中p-AKT陰性者50例（50/103，48.5%），p-AKT陽性者53例（53/103，51.5%）；Ⅲ級組，共23例（23/126，18.3

13、%），其中p-AKT陰性者4例（4/23，17.4%），p-AKT陽性者19例（19/23，82.6%）。采用卡方檢驗分析兩組間p-AKT的表達情況，χ2=7.451，P=0.006，差異有統(tǒng)計學意義。提示術后病理組織學分級Ⅲ級組中p-AKT的陽性表達率較高。
　　6.根據HER2表達情況分為：HER2陰性組共92例（92/126，73.0%），其中p-AKT陽性者47例（47/92，51.1%）；HER2陽性組共34例（34/1

14、26，27.0%），其中p-AKT陽性者25例（25/34，73.4%）。應用卡方檢驗分析p-AKT在兩組中的表達情況：χ2=5.106，P=0.024，差異有統(tǒng)計學意義。提示在HER2陽性組中p-AKT陽性率較高。
　　7.根據患者在隨訪過程中是否發(fā)生過復發(fā)轉移等不良事件的情況將126例乳腺癌患者分為：無復發(fā)轉移組，共83例（83/126，65.9%）；復發(fā)轉移組，共43例（43/126，34.1%）。兩組p-AKT陽性率分別為

15、50.6%和69.8%?？ǚ綑z驗結果示兩組間p-AKT的表達情況差異具有統(tǒng)計學意義，χ2=4.248，P=0.039。提示發(fā)生復發(fā)轉移組 p-AKT陽性率較高。
　　8.按照隨訪終點患者的存活情況將患者分為：存活組，共95例（95/126，75.4%）；死亡組，共31例（31/126，24.6%）。兩組p-AKT陽性率分別為49.5%和80.6%。采用卡方檢驗分析，結果示：χ2=9.247， P=0.002，差異有統(tǒng)計學意義。提示

16、在死亡組中p-AKT陽性率較高。
　　9.p-AKT表達情況與患者年齡、組織學分級、有無脈管瘤栓及ER、PR、Ki-67的表達情況均無關（均P>0.05）。
　　10.AKT表達情況與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移數目、術后TNM臨床分期、組織學分級、有無脈管瘤栓及ER、PR、HER2、Ki-67的表達情況、DFS、OS均無關（均P>0.05）。
　　11.p-AKT陽性組五年OS低于p-AKT陰性組（73.6%，92

17、.6%），χ2=9.461，P=0.002，差異有統(tǒng)計學意義。p-AKT陽性組五年DFS低于p-AKT陰性組（62.5%，83.3%），χ2=5.002，P=0.025，差異有統(tǒng)計學意義。這兩項結果均提示p-AKT的陽性表達與不良預后有關。
　　12.將單因素分析得到的對乳腺癌患者生存期有影響的因素納入COX多因素分析，發(fā)現淋巴結轉移情況（P=0.033，HR=8.726）、術后TNM臨床分期（P=0.015，HR=8.348）是

18、影響乳腺癌患者OS的有意義的預后獨立風險因素。
　　13.將單因素分析得到的對乳腺癌患者復發(fā)轉移有影響的因素納入COX多因素分析，發(fā)現只有淋巴結轉移情況（P=0.004，HR=13.324）是影響乳腺癌患者DFS的有意義的預后獨立風險因素。
　　14.根據Mfn2表達情況將126例患者分為：Mfn2（-）組，共21例（21/126，16.7%）；Mfn2（+）組，共55例（55/126，43.7%）；Mfn2（++）組，共2

19、5例（25/126,19.8%）；Mfn2（+++）組，共25例（25/126,19.8%）。四組中p-AKT的陽性率分別為：76.2%，74.5%，48.0%，12.0%。采用卡方檢驗分析四組間 p-AKT的表達情況，χ2=31.569，P＜0.001，差異有統(tǒng)計學意義。p-AKT表達情況與Mfn2表達情況進行相關分析，結果顯示：r=-0.455，P＜0.001，說明p-AKT表達情況與Mfn2表達情況呈負線性相關。Mfn2的表達降低

20、了p-AKT的表達水平，提示Mfn2可能是潛在的抑癌基因。
　　結論:
　　1.p-AKT在乳腺癌組織中的陽性率較乳腺正常導管上皮組織升高，提示p-AKT可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關。
　　2.p-AKT的表達水平與術后的腫瘤直徑、淋巴結轉移情況、病理TNM臨床分期均呈正相關，在組織學分級Ⅲ組及HER2陽性組中p-AKT陽性率較高。較大的腫瘤直徑、較多的淋巴結轉移、HER2陽性、較高的TNM臨床分期及組織學分級均為提示不

21、良預后的危險因素，提示p-AKT的陽性表達與乳腺浸潤性導管癌的腫瘤惡性程度呈正相關。
　　3.p-AKT的陽性表達與乳腺浸潤性導管癌患者DFS及OS呈負相關，生存分析結果顯示p-AKT的陽性表達與乳腺浸潤性導管癌患者的預后不良有關，但其不能作為影響乳腺浸潤性導管癌患者的獨立預后因素。
　　4.AKT的表達情況與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移數目、術后TNM臨床分期、組織學分級、有無脈管瘤栓及ER、PR、Ki-67、HER2的