酪氨酯羥化酶基因啟動子調控外源性Calbindin D-28k特異性表達轉基因小鼠的鑒定.pdf_第1頁
已閱讀1頁，還剩50頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內容提供方，若內容存在侵權，請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的：檢測酪氨酸羥化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)基因啟動子調控外源性Calbindin D-28k特異性表達轉基因小鼠腦內不同區(qū)域鈣結合蛋白D-28k( Calbindin D-28k，CaBP)特異性表達情況，以驗證已建立的轉基因小鼠系。
　　 方法：提取轉基因小鼠DNA，聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)檢測轉入的外源性Calbindin D-28k。篩選出攜

2、帶該目的基因的陽性小鼠，擴群。免疫熒光觀察轉基因小鼠和正常小鼠的嗅球（Olfactory Bulb，OB）、黑質（Substantia Nigra，SN）、海馬（hippocampus，Hi）、小腦(cerebellum，CB)及大腦皮層( cerebral Cortex，CC)中CaBP陽性細胞的數(shù)量和與TH共表達情況。選取穩(wěn)定表達外源性Calbindin D-28k小鼠設為轉基因組(Tg)，未表達外源性基因的小鼠設為轉基因陰性對照組

3、(nTg)，野生型小鼠為正常對照組（wild）。蛋白質印跡方法檢測三組小鼠上述五個區(qū)域CaBP的表達量。
　　 結果：PCR檢測4只轉基因陽性原代鼠的子代，結果顯示，2只原代鼠能穩(wěn)定遺傳外源性Calbindin D-28k。取2號原代鼠F1代作為種子，擴群繁殖，F(xiàn)3、F4代中外源性Calbindin D-28k都能穩(wěn)定遺傳，轉基因小鼠數(shù)量達到35只，用2號原代鼠初步建立轉基因小鼠系。
　　 進一步檢測轉基因小鼠外源性Ca

4、lbindin D-28k在腦內不同部位的特異性表達，免疫熒光結果顯示，轉基因小鼠嗅球、黑質的CaBP陽性細胞數(shù)顯著多于正常鼠(P＜0.05）。而海馬、小腦、大腦皮層的CaBP陽性細胞數(shù)與正常小鼠無明顯差異。
　　 蛋白質印跡結果顯示，轉基因組小鼠嗅球及中腦黑質部CaBP表達量顯著高于轉基因陰性組和正常組小鼠（P＜0.05）。而海馬、小腦、大腦皮層的CaBP表達量與轉基因陰性組和正常組小鼠無明顯差異。轉基因陰性組小鼠上述五個區(qū)域

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網頁內容里面會有圖紙預覽，若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論