血漿Exosomes生物學特征及血漿Exosomes對巨噬細胞功能影響的初步研究.pdf

1、復旦大學碩士學位論文血漿Exosomes生物學特征及血漿Exosomes對巨噬細胞功能影響的初步研究姓名:李丹專業(yè):臨床檢驗診斷學指導導師:范華弊研究員指導小組成員:楊潔任亞娜楊贅銘二O一一年五月復旦大學碩l學位論文中文摘要目的1.研究人血漿Exosomes小體的生物學特征，了解血漿Exosomes在免疫系統(tǒng)中的作用。2.通過將人血漿Exosomes小體與體外誘導分化獲得的人Ml巨噬細胞共孵育，研究巨噬細胞的Wntsa通路是否被血漿Ex

2、osomeS小體激活。方法:1.采用超速離心和超濾的方法分離純化血漿外泌體樣小體，從而獲得無菌的血漿外泌體樣小體。用透射電鏡觀察血漿Exosomes形態(tài)流式檢測血漿ExosomeS分子表型Westernblot檢測血漿Exosomes的蛋白。2.從健康人的外周血中分離PBMCS，然后體外培養(yǎng)誘導獲得I型巨噬細胞。通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)及流式檢測細胞表面分子確定培養(yǎng)細胞是否為巨噬細胞。將血漿外泌體樣小體與I型巨噬細胞混合培養(yǎng)后，提取巨噬細

3、胞的RNA，經(jīng)逆轉錄擴增及電泳比較未受血漿外泌體樣小體刺激的巨噬細胞及受刺激的巨噬細胞的炎性因子基因的變化，如:ILI日、IL6、TNFa、兒10。用流式檢測血漿外泌體樣小體處理巨噬細胞不同時間段胞內CaZ‘的變化，其中以Wntsa刺激巨噬細胞胞內Ca2的變化做陽性對照組。用WesternBlot方法檢測了血漿外泌體樣小體刺激的巨噬細胞CamKH是否發(fā)生了磷酸化。結果:1.從健康人血漿中超速離心獲得ExoSOmes。用透射電鏡觀察小體形

4、態(tài)，這些小體形態(tài)均一，為圓形囊泡結構采用CD63抗體包被磁珠捕獲的血漿Exosomes樣小體的CD81的陽性率為73.68%，17.83%的血漿Exosomes樣小體表達CD86，HLA一DR陽性率為60.63%，血漿Exosomes樣小體還表達勃附相關的分子CD54和CD1IC，陽性率分別為14.66%和17.83%血漿Exosomes富含有CD63和CD81蛋白，而且通過實驗還發(fā)現(xiàn)小體含有卜LA一DR、CDSO、CD86和Wntsa