基于酶促等溫指數(shù)擴增技術的生物傳感方法研究.pdf

1、酶促等溫指數(shù)擴增技術（IEXPAR），是一種結合單鏈剪切和聚合酶延伸的等溫擴增技術，這種技術具有很高的擴增效率。其特點在于利用特殊的切刻內切酶識別特異的堿基序列并且只剪切雙鏈 DNA中的一條鏈。在聚合酶的作用下，以雙鏈DNA中未被剪切的DNA鏈作為模板從剪切斷端開始發(fā)生聚合反應，通過鏈置換的方式置換下被剪切的那條DNA鏈。同時，新合成的DNA雙鏈在兩種酶作用下又發(fā)生新的剪切和聚合反應，從而連續(xù)不斷地生成大量的單鏈DNA。本研究利用此技術

2、中內切酶具有特異性的識別能力和等溫擴增反應擴增出的單鏈易于檢測等優(yōu)點，制備了兩種生物傳感器分別用于核酸和蛋白的檢測。
　　1.基于酶促等溫指數(shù)擴增技術的電化學生物傳感方法研究
　　本節(jié)描述了一種基于酶促等溫指數(shù)擴增技術的電化學生物傳感器用于雙鏈基因的檢測。天然條件下生物體中的DNA都是長的雙鏈狀態(tài)，這就導致了其很難被直接檢測。本方法首先用切刻內切酶特異性的切割雙鏈目標物中的一條鏈，然后斷端在聚合酶的作用下發(fā)生延伸反應，隨后以

3、鏈置換的方式得到一條長的單鏈。長單鏈可以催化發(fā)夾自組裝反應，生成新的雙鏈DNA，然后引發(fā)新的等溫擴增反應并生成短單鏈。短單鏈可以與金電極表面發(fā)夾結構的捕獲探針結合并產(chǎn)生信號的改變。本方法對雙鏈DNA檢測具有良好的分析性能，其檢測范圍為2 fM到500 pM，最低檢測線為1.6 fM。
　　2.基于核酸自組裝結構構象變化和酶促等溫指數(shù)擴增技術的熒光生物傳感方法研究
　　本節(jié)描述了一種基于核酸自組裝結構構象變化和酶促等溫指數(shù)擴增

4、技術的熒光生物傳感方法用于VEGF的檢測。這種核酸自組裝結構包括一條等溫擴增模板鏈，一條適配體鏈，一條引物鏈和一條封閉鏈。在沒有目標物存在的情況下，該結構的構象穩(wěn)定并且不會發(fā)生等溫擴增反應。當目標物存在時，自組裝結構發(fā)生構象變化，致使引物鏈與模板鏈完全雜交，從而觸發(fā)等溫擴增反應。擴增反應產(chǎn)生的單鏈與分別標記有熒光物和淬滅物的雙鏈DNA發(fā)生鏈置換反應，產(chǎn)生熒光信號的增加。本方法為VEGF的檢測提供了一種靈敏、特異和簡單的思路。該熒光傳感器