上調BTG3基因表達對食管腺癌增殖侵襲的作用.pdf

1、背景與目的：
　　食管癌是常見惡性腫瘤之一,其主要的組織學類型是食管鱗狀細胞癌（ESCC）。然而，食管腺癌的發(fā)病率在近幾十年中也有所增加并且該增長趨勢的潛在原因還未完全明了。在所有的實體腫瘤中，食管癌是預后最差的腫瘤之一，其五年存活率的患者僅占14％。外科手術仍為主要的根治方法，但它僅適于少于50%的患者，其原因在于大多數(shù)的食管癌患者在癌癥晚期才被診斷出來。因此，深入探索食管腺癌的分子機制是提高早期診斷和治療效果的基礎。
　

2、　B細胞遷移基因3(B cell translocation gene3, BTG3)編碼的蛋白屬于抗惡性細胞增殖蛋白，在人類細胞中B細胞遷移基因(B cell translocation gene)／ErbB2轉錄因子(transducer of ErbB2, Tob)家族也包括BTG1、BGT2、ToB、ToB2和PC3b。這些蛋白以氨基酸分子上一段較特異的BTG結構域為共同特征，它們的N端有104-106個具有同源性的氨基酸，在各

3、類細胞中調節(jié)細胞周期進程。BTG／Tob蛋白家族可通過轉錄調節(jié)機制或經翻譯后的修飾被激活或抑制。一些研究表明， BTG／Tob蛋白直接參與癌癥中。在肺癌或甲狀腺細胞癌患者中，頻繁觀察到有磷酸化活性狀態(tài)的Tob1或Tob1的表達減少參與其中。BTG2的下調或受損表達在前列腺癌或乳腺癌的患者中可觀察到。BTG3和一個在細胞周期進程中進入S期的重要的轉錄因子E2F1相互作用。關于Tob1，在肺癌樣本中可高頻率的觀察到BTG3的低度表達。敲除B

4、TG3基因的小鼠，肺癌的發(fā)病率同樣顯示出顯著增高。在腎癌中，通過DNA甲基化作用,使啟動子失活,降低BTG3的表達。然而，BTG3在食管腺癌中的表達特性和作用仍不清楚。為此,本項研究設定了兩個研究目的：明確食管腺癌標本中BTG3基因表達水平；揭示上調BTG3基因表達對食管腺癌細胞增殖、周期、轉移的影響。
　　方法:
　　1.收集39例食管腺癌組織及相對應的癌旁正常組織手術標本,熒光定量RT-PCR和Western-blot檢

5、測BTG3 mRNA和蛋白表達水平；并分析BTG3基因表達水平與食管腺癌標本病理學特征的關系。
　　2.構建BTG3真核表達載體（pcDNA3.1-BTG3）、轉染、篩選得到穩(wěn)定上調BTG3的食管腺癌OE-33細胞株。
　　3.通過CCK8細胞增殖實驗和克隆形成實驗檢測上調食管腺癌BTG3基因表達對細胞增殖的影響。
　　4.采用流式細胞術和Western-blot檢測上調食管腺癌BTG3基因表達對細胞周期的影響。

6、>　　5.使用流式細胞術檢測上調食管腺癌BTG3基因表達對細胞凋亡的作用。
　　6.應用Transwell和劃痕實驗檢測上調食管腺癌BTG3基因表達對細胞侵襲和轉移的作用。
　　7.采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據分析，單因素方差用于分析多項指標間的比較，LSD-t檢驗用于比較兩項指標間的比較；t檢驗用于計量資料；Spearman相關分析用于相關性檢驗，以α=0.05為顯著性水準。
　　結果:
　　1.熒光定

7、量RT-PCR和Western blot檢測顯示，食管腺癌組織中BTG3 mRNA和蛋白表達水平均顯著低于癌旁正常組織中表達水平（P<0.05）；BTG3 mRNA表達水平與食管腺癌患者的淋巴結轉移情況和TNM分期有關（P<0.05），而與其性別、年齡以及腫瘤分化程度無關（P>0.05）。
　　2. CCK-8實驗分析結果顯示：Ex-BTG3組細胞的增殖能力在轉染后2天出現(xiàn)顯著抑制（P<0.05）。克隆形成實驗結果顯示：兩周后Ex

8、-BTG3組的細胞克隆細胞團形成顯著少于NC組（P<0.05）。
　　3.細胞周期結果顯示：Ex-BTG3組細胞G1/G0期細胞比例較NC組顯著增加（P<0.05），同時S期比例較NC組顯著減少（P<0.05）。Western-blot結果顯示：Ex-BTG3組細胞周期蛋白Cyclin A, Cyclin D1的表達較NC組顯著降低，說明上調BTG3表達可減少食管腺癌細胞分裂期細胞比例，使細胞分裂阻滯。
　　4.流式細胞術結

9、果顯示：NC組細胞凋亡率為（7.14±0.91）%，Ex-BTG3組細胞凋亡率為（16.1±1.92）%。Ex-BTG3組細胞凋亡率較NC組顯著升高（P＜0.05）。
　　5. Transwell分析結果顯示：與NC組相比，Ex-BTG3組遷移通過基質膠的OE-33細胞數(shù)均顯著降低（P<0.01）。劃痕實驗結果顯示：Ex-BTG3組的細胞遷移距離顯著低于NC組（P<0.05）。說明BTG3過表達可抑制食管腺癌細胞的侵襲能力。