Notch1對NSCLC EMT獲得性EGFR-TKIs耐藥的調控作用.pdf

1、目的：探討Notch1對非小細胞肺癌發(fā)生上皮-間質轉化(EMT)獲得性酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)抵抗作用及其相關機制。
　　方法：應用免疫組化(IHC)檢測組織標本中肺癌中上皮-間質轉化(EMT)相關蛋白。細胞實驗將實驗分為6組：Control、Mock、N1CD、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib、N1ICD-shRNA組，N1ICD慢病毒過表達載體(LV-N1ICD)感染PC9上調Notch-1信號

2、通路，NICD-shRNA慢病毒干擾載體(LV-N1ICD-shRNA)感染PC9下調Notch-1信號通路，Mock是慢病毒空載體，72h后CCK-8檢測細胞活力，應用劃痕實驗分別檢測細胞增殖及遷移能力，流式細胞儀檢測細胞周期及凋亡，Western–blotting檢E-cadhenrin、Vimentin、Notch-1、Slug蛋白的表達變化。根據(jù)Western–blotting檢測結果應用免疫組化(IHC)檢測臨床非小細胞肺癌(

3、NSCLC)組織及癌旁組織中的Slug蛋白的表達差異。
　　結果:IHC檢測NSCLC標本肺癌組織及癌旁組織E-cadhenrin、Vimentin、Notch1蛋白的表達差異結果示：在NSCLC中Notch1、Vimentin蛋白表達上調，E-cadherin下調；而癌旁組織中Notch1、Vimentin蛋白表達下調，E-cadherin上調。在細胞試驗中，CCK-8檢測細胞活力結果示：PC9在N1ICD組中增殖活力明顯增強。

4、劃痕試驗結果顯示：N1ICD組中PC9細胞劃痕遷移明顯。細胞自動分析和分選裝置檢測細胞凋亡結果示：N1ICD組與Control、Mock、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib、N1ICD-shRNA組比較，PC9細胞凋亡比例顯著減少。Western-blotting檢測結果顯示：在N1ICD組中，E-cadherin蛋白表達量明顯減少，與Control、Mock、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib及N1IC

5、D-shRNA組比較有顯著性差異(P<0.05)；Vimentin、Notch1、Slug等蛋白表達量明顯增多，與Control、Mock、Gefitinib、N1ICD+Gefitinib及N1ICD-shRNA組比較有顯著性差異(P<0.05)。IHC檢測NSCLC標本肺癌組織及癌旁組織Slug蛋白的表達差異結果示肺癌組織中Slug蛋白表達量增加。
　　結論：過表達Notch1信號會使得非小細胞肺癌EGFR-TKIs抵抗性增加