Metformin抑制IL‐6-STAT3信號途徑克服肺癌EGFR‐TKI獲得性耐藥的作用和機制的研究.pdf

1、研究背景:
　　吉非替尼(Iressa)和厄洛替尼(Tarceva)是可逆的小分子表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI),該類藥物對于有EGFR突變的非小細胞肺癌患者具有非常好的治療效果,現(xiàn)已作為具有EGFR突變的非小細胞肺癌患者的一線治療藥物。然而,大多數(shù)接受EGFR-TKI治療初始有效的非小細胞肺癌患者在開始使用EGFR-TKI后10個月內將對 EGFR-TKI藥物發(fā)生耐藥,此后患者的病情將進一步惡化。因此EGF

2、R-TKI獲得性耐藥成為限制 EGFR-TKI廣泛應用的瓶頸,而研究一種能夠逆轉EGFR-TKI獲得性耐藥的策略在肺癌的治療方面顯得尤為重要。
　　對于EGFR-TKI耐藥機制的研究很多,近年來的研究發(fā)現(xiàn)有多種不同的分子機制參與其中,主要包括EGFR二次突變(EGFR T790M)、MET基因擴增以及上皮間質轉化(EMT)等機制。研究表明EMT的發(fā)生對于EGFR-TKI耐藥的產生有非常大的相關性,現(xiàn)已證實TGF-β是EMT的主要驅

3、動因子,并且TGF-β可以激活IL-6信號通路,進而促進EMT以及誘導EGFR-TKI耐藥。與此同時有研究證實當IL-6/STAT3信號通路被抑制時,EGFR-TKI耐藥程度減弱。因此我們認為抑制IL-6/STAT3信號通路的激活以及逆轉EMT進程將有可能成為克服EGFR-TKI耐藥。
　　二甲雙胍(Metformin)作為一種被廣泛應用的治療糖尿病藥物,如今逐漸被發(fā)現(xiàn)在腫瘤治療領域具有巨大的潛力。相關臨床實驗表明服用二甲雙胍可以

4、降低罹患腫瘤的風險以及腫瘤的死亡率,而小鼠腫瘤模型體內實驗發(fā)現(xiàn)二甲雙胍展示出了相當強的抑制腫瘤生長的效應,當二甲雙胍與化療藥物(紫杉醇、順鉑)聯(lián)合在裸鼠移植瘤模型中使用時,能夠有效的抑制移植瘤的生長以及延長裸鼠移植瘤模型的生存期。此外,二甲雙胍可以阻斷TGF-β誘導的EMT過程,降低IL-6分泌以及抑制STAT3活性。因此我們有理由認為二甲雙胍可能通過抑制 IL-6/STAT3信號通路的激活以及逆轉 EMT進程進而克服EGFR-TKI耐

5、藥。
　　目的:
　　表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)對于 EGFR突變陽性的非小細胞肺癌患者具有非常好的療效,然而EGFR-TKI獲得性耐藥成為嚴重影響其臨床療效以及廣泛應用的瓶頸?，F(xiàn)有研究表明抑制IL-6/STAT3信號通路的激活以及逆轉EMT進程可以克服 EGFR-TKI耐藥。本研究旨在研究二甲雙胍是否能夠通過抑制IL-6/STAT3信號通路的激活以及逆轉EMT進程克服肺癌EGFR-TKI耐藥。

6、r>　　方法:
　　本研究主要通過 BrdU、MTT、流式細胞凋亡檢測、免疫熒光、免疫組化、侵襲實驗、Western blot、構建裸鼠移植瘤等實驗方法檢測二甲雙胍通過抑制 IL-6/STAT3信號通路的激活以及逆轉EMT進程在體外和體內克服肺癌細胞發(fā)生EGFR-TKI耐藥。
　　結果:
　　1.本研究證實了被廣泛應用的糖尿病藥物二甲雙胍在體外可以有效的抑制IL-6/STAT3信號通路的激活以及逆轉EMT進程,并且提高

7、EGFR-TKI耐藥肺癌細胞對EGFR-TKI的敏感性。
　　2.外源性直接給予 IL-6或者構建內源性高表達 IL-6細胞模型均可以誘導EGFR-TKI敏感細胞株發(fā)生EGFR-TKI耐藥。當輔以二甲雙胍聯(lián)合IL-6處理時,發(fā)生EGFR-TKI耐藥的敏感細胞株恢復對EGFR-TKI的敏感性。
　　3.裸鼠移植瘤體內實驗結果發(fā)現(xiàn)二甲雙胍聯(lián)合 EGFR-TKI喂食裸鼠可有效抑制了裸鼠移植瘤的生長。并且有效降低了裸鼠體內IL-6的