止血帶休克后主動(dòng)脈RAS穩(wěn)態(tài)失衡在血管低反應(yīng)性及損傷中的作用.pdf

1、目的：腎素血管緊張素系統(tǒng)（renin angiotensin systems，RAS）內(nèi)在穩(wěn)態(tài)失衡在多種疾病及損傷中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)主要研究止血帶休克（tourniquet shock，TS）后RAS穩(wěn)態(tài)失衡在血管低反應(yīng)性及損傷中的作用，為揭示血管低反應(yīng)發(fā)生機(jī)制及治療策略提供新的思路。
　　方法：1 TS模型的制備：8月齡C57B6的雄性小鼠，止血帶套扎雙后肢阻斷血流，2h后解套扎進(jìn)行再灌注。實(shí)驗(yàn)第一部分分7組，對(duì)照組及6個(gè)模

2、型組，模型組分別于再灌注10min、1h、2h、4h、6h、12h后處死，對(duì)照組不進(jìn)行套扎與再灌注，其余操作同模型組。實(shí)驗(yàn)第二部分分5組，即野生對(duì)照組（WT）、野生-休克組（WT-TS）、野生-休克-給藥組（WT-TS-DIZE）、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2（Angiotensin converting enzyme2，ACE2）的基因敲除對(duì)照組（KO）、基因敲除-休克組（KO-TS），給藥組于實(shí)驗(yàn)前以10mg/kg/d的劑量給予ACE2的激動(dòng)

3、劑——二乙酰胺三氮脒（Diminazene Diaceturate，DIZE）進(jìn)行皮下注射給藥，共計(jì)28天，WT-TS、WT-TS-DIZE、KO-TS各組缺血2h再灌注4h后處死小鼠，WT、KO各組不進(jìn)行套扎與再灌注，其余操作同模型組。2損傷指標(biāo)的測(cè)定：多普勒血流儀測(cè)定肢體血流障礙，頸動(dòng)脈插管法測(cè)定血壓值，離體血管張力測(cè)定儀測(cè)定主動(dòng)脈血管收縮反應(yīng)性，HE染色結(jié)合透射電鏡評(píng)價(jià)血管形態(tài)學(xué)損傷。3 RAS成分測(cè)定：蛋白免疫印跡法（weste

4、rn blot，WB）檢測(cè)血管組織中血管緊張素 II1型受體（AT1）、血管緊張素（1-7）受體（Mas)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（Angiotensin converting enzyme，ACE）、ACE2蛋白的表達(dá)。采用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)血清中血管緊張素II（AngiotensinⅡ，AngII）/血管緊張素（1-7）（Angiotensin1-7，Ang

5、(1-7)）含量。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)第一部分結(jié)果顯示，與對(duì)照組小鼠相比，模型組小鼠肢體血流量隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減少；血壓在再灌注10min時(shí)間點(diǎn)先升高隨后逐漸降低；主動(dòng)脈血管對(duì)去甲腎上腺素（Noradrenalin，NE）的反應(yīng)性在再灌注10min時(shí)間點(diǎn)升高隨后下降、再灌注4h時(shí)間點(diǎn)的血管反應(yīng)性最低；形態(tài)學(xué)損傷評(píng)分逐漸增高；主動(dòng)脈血管AT1受體與ACE2蛋白表達(dá)下降；Mas受體與ACE蛋白表達(dá)升高；血清中AngⅡ的含量升高，A

6、ng(1-7)的含量降低。實(shí)驗(yàn)第二部分結(jié)果顯示，與WT-TS組相比，WT-TS-DIZE組主動(dòng)脈對(duì)NE的反應(yīng)性明顯升高，血管損傷程度明顯減輕，AT1受體、ACE2表達(dá)升高，Mas受體表達(dá)降低，ACE表達(dá)基本無(wú)變化，血清AngII生成減少，Ang(1-7)生成增多；與WT相比，KO組主動(dòng)脈血管對(duì)NE反應(yīng)性升高，形態(tài)學(xué)損傷程度不明顯，主動(dòng)脈血管AT1、MAS、ACE蛋白表達(dá)均增高，ACE2無(wú)表達(dá)，血清AngII生成增多，Ang(1-7)基本

7、無(wú)變化；與WT-TS相比，KO-TS組主動(dòng)脈對(duì)NE的反應(yīng)性明顯下降，形態(tài)學(xué)損傷程度增高不明顯，主動(dòng)脈血管AT1與ACE表達(dá)增高不明顯，Mas增高明顯（P<0.05），ACE2無(wú)表達(dá)，血清AngII、Ang(1-7)變化不明顯。
　　結(jié)論：1止血帶休克后RAS系統(tǒng)激活，隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，血管低反應(yīng)性及損傷程度均增加，主動(dòng)脈ACE/AngII/AT1軸與ACE2/Ang(1-7)/Mas軸表達(dá)失衡，且兩軸隨再灌時(shí)間延長(zhǎng)差異性表達(dá)愈