棉鈴蟲單核衣殼核型多角體病毒(HaSNPV)Orf99基因的初步研究.pdf

1、棉鈴蟲單核衣殼核型多角體病毒(Helicoverpa armigera single nucleocapsidnucleopolyhedrovirus，HaSNPV)是一類雙鏈環(huán)狀DNA 病毒，其分子生物學和基因功能研究已取得很大進展。開放閱讀框99（open reading frame 99，orf99）是HaSNPV的一個功能未知的特有基因，本文首次對HaSNPV G4株基因組中的orf99基因進行初步實驗研究報道。
　　

2、Orf99基因和Ha99 蛋白序列通過生物信息學分析表明：orf99基因長為357bp，預計編碼118個氨基酸，預測蛋白質分子大小為14．5KDa；orf99基因起始密碼子上游-62位和-49位分別存在早期啟動子信號序列“CAGT ”和“TATA ”；
　　 該基因無信號肽，無跨膜結構；由SMART 分析該蛋白存在鐵蛋白類似結構和氧化還原酶活性; 通過PSI-BLAST 比對發(fā)現(xiàn)，orf99 僅與美洲棉鈴蟲HzSNPV orf1

3、02同源性高達99％，另外由PHYLOGENETIC TREE 分析得知orf99在Helicoverpaarmigera nucleopolyhedrovirus、 Helicoverpa armigera NPV、 Helicoverpaarmigera NPV NNg1、Helicoverpa zea SNPV 中比較保守，遺傳距離比較近，推測他們可能是從同一祖先分支進化的。
　　 本試驗中，我們用表達載體pGEX-KG

4、及表達宿主大腸桿菌BL21 對orf99基因進行谷胱甘肽（GST）融合表達，表達產物約為40kDa，與預期的大小相符。
　　 另外,我們成功構建了真核表達載體pIZ/V5-His-egfp-orf99,該載體利用熒光蛋白基因egfp 作為報告基因，將orf99和egfp 連接在pIZ/V5-His 上，形成融合表達產物的載體,為進行細胞定位做了準備.
　　 為研究orf99基因的功能，我們首先設計一對200bp 左右，含