殼聚糖介導RNA干擾技術靶向cyclin D1基因對K562細胞抗腫瘤的實驗研究.pdf

1、RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是最近發(fā)展的一種封閉基因表達的有效方法，其通過將雙鏈RNA(doublestrandRNA，dsRNA)導入細胞中，在Dicer酶的作用下產(chǎn)生有活性的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，與該段RNA同源的mRNA產(chǎn)生特異性降解，從而導致特異基因表達抑制的轉錄后基因沉默現(xiàn)象(posttranscriptionalgenesilencing，PTGS)。許

2、多研究表明在哺乳動物細胞中應用RNAi能高效抑制內源性和外源性基因的表達，因此應用RNAi技術抑制某一異?；虮磉_將可能用于病毒、腫瘤等疾病的治療。 基因治療是指通過有效的基因傳遞系統(tǒng)，將質粒DNA(plasmidDNA，pDNA)插入到目的細胞中，進行轉錄，最終將攜帶的基因信息傳遞給所連接的細胞中，從而達到基因治療的作用?；蛑委熤幸粋€關鍵問題是如何選擇合適的基因遞送載體，尋找對病變組織有選擇性、高效率且低毒的載體，以協(xié)助目的

3、基因進入靶組織。目前，基因遞呈載體主要有病毒載體(viralvector)和非病毒載體(non-viralvector)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖是一種具有生物相容性和可生物降解的新型醫(yī)用生物材料，與病毒載體或其它非病毒載體相比，具有低廉、無感染性、缺乏免疫原性、無致突變以及便于臨床重復給藥等優(yōu)點，殼聚糖及其衍生物能與DNA形成聚電解質聚合物，是一種持久安全性和高效的陽離子聚合物基因轉移運輸載體，具有良好的臨床應用前景。 Cycl

4、inD1為G1期細胞周期素，與細胞周期素依賴激酶-4/6(Cyclindependentkinase4and6，CDK4/CDK6)結合而形成復合物，使視網(wǎng)膜母細胞瘤(Rb)編碼蛋白磷酸化，而與轉錄因子E2F分離，驅動細胞由G1期進入S期，促進細胞增殖，因而當cyclinD1或CDK4/CDK6表達失控時，可能導致細胞增殖周期失調。CyclinD1過表達可加速細胞進入S期，使細胞G1期縮短，加速細胞增殖，使細胞表型發(fā)生轉化。研究表明，許

5、多惡性腫瘤組織中都有cyclinD1的過表達。過表達的cyclinD1與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關；并且與腫瘤細胞對化療藥物抗拒性有關。 本課題主要研究內容：通過基因重組技術構建針對人cyclinD1基因的特異性小發(fā)夾RNA(smallhair-pinRNA，shRNA)真核表達載體，采用RNA干擾技術，運用殼聚糖作為基因治療載體轉染人髓性白血病K562細胞，體外觀測其對cyclinD1基因的沉默作用以及RNAi后對K562