姜黃素血漿樣品的高通量液相色譜定量分析及其藥代動力學研究.pdf

1、藥物代謝動力學是定量描述藥物進入體內以后的吸收、分布、代謝、排泄過程，通過測定生物樣本中的藥物或者代謝產(chǎn)物的濃度，可以更好的闡明藥物的藥效或者毒性，為新藥研究的代謝篩選和臨床用藥的安全有效提供重要依據(jù)。隨著組合化學技術和天然藥物分離制備技術的發(fā)展，大量的候選藥物需要進行藥代動力學評價，這就要求建立并優(yōu)化相關分析方法對生物樣品中的目標成分（藥物、代謝產(chǎn)物、其他外源性成分）進行高靈敏度、快速準確、低消耗的定量分析。本文構建了“準確、靈敏、低

2、耗、高通量”的分析策略，建立了基于常規(guī)液相柱的快速有效分離分析方法，將其應用到姜黃素的藥代動力學研究中。全文由四章組成：
　　 第一章概述，主要論述了生物樣品的快速高通量分析方法在藥代動力學中的重要性和應用進展，姜黃素的研究現(xiàn)狀以及其體內外含量測定所用的常規(guī)檢測方法，在此基礎上本文闡述了實驗立題依據(jù)和研究內容。
　　 第二章LC/MS/MS方法，為了研究軟膠囊中姜黃素在SD大鼠體內的藥代動力學特點，選擇姜黃素提取物軟膠囊

3、內容物口服給藥，姜黃素提取物注射液靜脈注射給藥兩種方式，考察軟膠囊中姜黃素在SD大鼠體內的藥代動力學參數(shù)，計算口服給藥軟膠囊內容物的絕對生物利用度。采用LC/MS/MS方法，血漿預處理采用甲醇沉淀蛋白（4:1，V/V）。色譜分離條件為：Ultimate）（B C-185μ50×4.6mm ID，柱溫25℃；流動相：甲醇：水（80:20），其中含有甲酸0.01％，采用等梯度洗脫方式，流速0.30ml/min，進樣量20μ L，分析時間6

4、min。質譜檢測條件為：采用ESI離子源、負離子檢測，選擇SRMI作方式進行一/二級質譜分析；其中姜黃素Q1（Mass）367、Q3（MaSS）149，Collision energy21.5eV；內標白藜蘆醇Q1（Mass）227、Q3（Mass）143，Collision energy16eV；Collision
　　 gas1.8 mTorr檢測器電壓1500V。
　　 第三章LC-UV方法，以姜黃素為研究對象，通

5、過對液相柱的選擇和優(yōu)化，建立了常規(guī)高效液相色譜-紫外檢測分析方法，用于姜黃素脂質體的質量控制和絕對生物利用度研究。分別對內標，流動相組成，流動相pH值，提取溶劑，液相色譜柱等影響因素做了系統(tǒng)的研究。最終使用Dikma色譜分析柱（5μm，100×4.6mm），流動相為乙腈：5％乙酸（75:25，v/v），流速為1mL/min，柱溫為25℃，進樣量為50μL，紫外檢測波長為420nm，內標為大黃素，用96孔板蛋白沉淀進行血漿樣品前處理，每個

6、樣品的分析周期為3min，最定量限為1ng/mL，常規(guī)條件下即可實現(xiàn)生物樣品的高通量分析。
　　 第四章HPLC-FLD方法，基于上述方法的特點與不足，在樣品前處理方法改進的基礎上，建立了HPLC-FLD法用于姜黃素生物樣品的快速分離分析。通過對實驗條件的優(yōu)化，最終選擇Dikma色譜分析柱（5μm，100×4.6mm）進行分析，流動相為乙腈：3％乙酸（80:20，V/V），流速為1mL/min，柱溫為25℃，進樣量為50μL，λ