乳酸菌發(fā)酵谷物提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用研究.pdf

1、惡性腫瘤一直以來(lái)都是威脅人類健康和生命的主要疾病，如何預(yù)防腫瘤成為了我們面臨的一個(gè)重大挑戰(zhàn)。隨著近年來(lái)食源性天然抗腫瘤物質(zhì)的研究越來(lái)越多，更多的人把目光轉(zhuǎn)移到了飲食防癌上。因此，篩選出更高效、安全的食源性抗腫瘤天然產(chǎn)物具有了重要的意義。我國(guó)大麥資源豐富、營(yíng)養(yǎng)全面，富含多種生物活性組分，是谷物中的全價(jià)營(yíng)養(yǎng)食物。利用微生物轉(zhuǎn)化，能夠更多、更有效地獲得大麥中的抗腫瘤活性成分，為食源性天然抗腫瘤食品的開發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也能為我國(guó)大麥資源的高

2、效利用提供新的思路。
　　本論文以大麥為原料，以乳酸菌為發(fā)酵菌株，篩選并制備乳酸菌發(fā)酵大麥提取物(LFBE)，通過(guò)測(cè)定發(fā)酵過(guò)程中主要成分的變化探究LFBE抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，通過(guò)體外細(xì)胞試驗(yàn)研究LFBE對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用，并對(duì)其抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行初步探討。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)MTT法評(píng)價(jià)發(fā)酵提取物的抗腫瘤活性，篩選出最佳的發(fā)酵組合。結(jié)果表明:乳酸菌發(fā)酵大麥提取物抗腫瘤活性顯著優(yōu)于其它谷物發(fā)酵提取物，在2mg

3、/mL時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率高達(dá)90.05％;從20株乳酸菌中篩選最適的發(fā)酵大麥菌株，初步選定已經(jīng)過(guò)鑒定、菌株安全性更高的植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum Dy-1)為發(fā)酵菌株，其半抑制濃度(IC50)為0.73mg/mL。
　　2.研究比較了乳酸菌發(fā)酵4種大麥過(guò)程中主要成分的變化。參照國(guó)標(biāo)等方法測(cè)定了發(fā)酵過(guò)程中蛋白質(zhì)、多酚、總糖的含量變化。結(jié)果表明:在0～48h發(fā)酵過(guò)程中，pH值逐漸降低，活菌數(shù)在12h達(dá)到

4、最高值，4種LFBE的蛋白質(zhì)含量先升后降，在36h達(dá)到峰值，多酚含量逐漸升高，總糖含量在12h達(dá)到最高值，隨后逐漸降低;其中揚(yáng)飼麥3號(hào)在發(fā)酵過(guò)程中的乳酸菌活菌數(shù)、蛋白質(zhì)以及多酚含量均高于其它三種大麥，其在發(fā)酵后相對(duì)分子質(zhì)量在25～40kDa的蛋白質(zhì)含量有顯著增加。故選擇揚(yáng)飼麥3號(hào)作進(jìn)一步的細(xì)胞試驗(yàn)和分離純化試驗(yàn)。
　　3.研究了LFBE對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的抑制作用。通過(guò)SDS-PAGE法觀察發(fā)酵過(guò)程中蛋白質(zhì)分子量的變化情況，

5、采用CCK-8法和倒置熒光顯微鏡及掃描電鏡觀測(cè)細(xì)胞增殖能力與形態(tài)變化，通過(guò)Hoechst/PI雙染法研究細(xì)胞凋亡，并利用單細(xì)胞凝膠電泳檢測(cè)細(xì)胞的DNA損傷。結(jié)果表明:LFBE能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，且具有時(shí)間-濃度依賴性。2mg/mL的LFBE分別處理細(xì)胞24 h、48 h、72 h后，其抑制率分別達(dá)到90.05％、93.34％和95.23％;LFBE能夠破壞細(xì)胞正常形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞皺縮變形，產(chǎn)生大量凋亡小體;同時(shí)LFBE的處理使