生防菌B10-26抑菌活性物質(zhì)研究.pdf

1、目的：篩選出對(duì)藥用植物病原菌防治效果較好的菌株，對(duì)其發(fā)酵液中所含活性物質(zhì)的理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行研究，為開(kāi)發(fā)防治藥用植物病害的生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。
　　方法：采用含毒介質(zhì)法比較5種生防菌對(duì)地黃、山藥上幾種常見(jiàn)病原菌的防治效果，篩選出抑菌作用最好的菌株，并對(duì)其抑菌機(jī)理進(jìn)行了觀察；通過(guò)有機(jī)溶劑萃取法、硫酸銨沉淀法和鹽酸沉淀法，對(duì)活性物質(zhì)進(jìn)行粗提取，比較三種方法的提取效果；對(duì)活性粗提物進(jìn)行溫度、pH、蛋白酶、紫外等穩(wěn)定性和茚三酮反應(yīng)等理化

2、性質(zhì)研究；利用玻璃層析柱和HPLC制備的方法對(duì)活性物質(zhì)進(jìn)行分離純化；通過(guò)蛋白膠條鑒定和LC-MS/MS等方法對(duì)活性物質(zhì)的種類進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果：
　　1．生防菌的篩選
　　生防菌SYB10、SYB16、YCB9、FQB6、B10-26對(duì)地黃輪紋病菌（Ascochyta molleriana Wint）、山藥根腐病菌(Fusarium solani Kuhn)、山藥枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、山藥

3、炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz)幾種病原菌都具有一定的抑制作用，但抑制效果存在較大差異。其中，對(duì)地黃輪紋病菌抑制作用最好的是YCB9和B10-26，菌落直徑分別為16.0mm和17.0mm，對(duì)其它3種病原菌抑制作用最好的都是B10-26。通過(guò)對(duì)菌絲形態(tài)變化的觀察，發(fā)現(xiàn)B10-26分泌的活性物質(zhì)可使菌絲膨脹，頂端出現(xiàn)囊泡，從而抑制菌絲的生長(zhǎng)。
　　2．B10-26發(fā)酵液中活性物質(zhì)的粗

4、提取和理化性質(zhì)研究
　　有機(jī)溶劑萃取法、硫酸銨沉淀法和鹽酸沉淀法均能從發(fā)酵液中提取出活性物質(zhì)，其中效果最好的是鹽酸沉淀法，提取率為100％。穩(wěn)定性研究表明活性物質(zhì)對(duì)溫度、pH、蛋白酶、紫外均有較好的穩(wěn)定性，同時(shí)與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生紫藍(lán)色，說(shuō)明活性物質(zhì)中可能存在蛋白或肽類物質(zhì)。
　　3.活性物質(zhì)的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定
　　通過(guò)玻璃柱層析和HPLC制備，最后得到一組由多個(gè)活性物質(zhì)組成的混合物，通過(guò)蛋白質(zhì)膠條鑒定和LC-MS/MS

5、質(zhì)譜鑒定，認(rèn)為活性物質(zhì)中主要包括脂肽類抗生素：C14BacillomycinD、 C15BacillomycinD、 C16BacillomycinD、 C17BacillomycinD，C14FengycinA、 C15FengycinA、 C16FengycinA、 C17FengycinA，C16FengycinB、C17FengycinB、C18FengycinB，C14Mycosubtilin、C15Mycosubtilin、

6、C16Mycosubtilin，不明確具體類型的Surfactin；同時(shí)還含有多烯類抗生素Dihydrobacillaene。
　　結(jié)論：篩選出了具有廣譜抑菌作用的生防菌B10-26，其發(fā)酵液中所含活性物質(zhì)理化性質(zhì)穩(wěn)定，通過(guò)分離純化，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中含有多種活性物質(zhì)，主要包括有BacillomycinD、FengycinA、FengycinB、Mycosubtilin和Surfactin等脂肽類抗生素和多烯類抗生素Dihydrobac