Mir-18a在nitrofen誘導大鼠CDH模型中表達及作用的研究.pdf

1、目的：
　　本研究的目的旨在構建Nitrofen誘導的大鼠先天性膈疝（CDH）模型，利用這一模型探討mir-17-92家族（包括miR-17-5p，miR-18a，miR-19b，miR-20a and miR-92）的表達變化，并對miR-18a的靶基因結締組織生長因子（CTGF）的表達差異進行分析，同時通過在體外大鼠肺上皮細胞（RLE-6TN）中過表達mir-18a以及抑制 mir-18a表達，分析其對 CTGF的調(diào)控作用，進

2、一步研究 mir-18a在CDH肺發(fā)育不良的發(fā)病機制中發(fā)揮的作用。
　　材料/方法：
　　SPF級大鼠懷孕后隨機分成實驗組和對照組兩組，并于懷孕后9.5天分別給予nitrofen和橄欖油灌胃。孕后21.5天剖腹產(chǎn)取出胎鼠并提取胎肺組織。利用熒光定量 PCR技術、蛋白印記雜交技術、免疫組化技術分別觀察兩組胎肺中mir-17-92家族以及mir-18a的靶基因結締組織生長因子（CTGF）的表達差異。體外培養(yǎng)大鼠肺上皮細胞（RLE

3、-6TN），分為對照組、陰性對照組、mir-18a模擬物組以及mir-18a抑制物組，轉(zhuǎn)染mir-18a模擬物（mimics）,mir-18a抑制物（inhibitor）到對應組別中，觀察轉(zhuǎn)染后mir-18a的靶基因CTGF的表達變化。
　　結果：
　　與對照組相比，mir-18a在nitrofen誘導CDH組胎肺中的表達顯著上調(diào)，mir-17-92家族其它基因無明顯表達差異，mir-18a的靶基因CTGF在nitrofen

4、誘導 CDH組胎肺中的表達顯著下降。在大鼠肺上皮細胞（RLE-6TN）中過表達mir-18a后，CTGF表達明顯下降。
　　結論：
　　本文通過構建 niteofen誘導大鼠 CDH模型以及大鼠肺上皮細胞轉(zhuǎn)染，對MiRNA的表達變化及在CDH肺發(fā)育不良中的作用進行了探討。通過實驗我們發(fā)現(xiàn)mir-18a在niteofen誘導的大鼠CDH胎肺中的表達明顯上調(diào)，通過大鼠肺上皮細胞過表達mir-18a我們發(fā)現(xiàn)mir-18a對其靶基因