OAZ1基因對慢性粒白血病K562細胞紅系分化及凋亡作用的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文OAZl基因對慢粒白血病K562細胞紅系分化及凋亡作用的研究Effectofornithinedecarboxylaseantizyme1ontheerythroiddifferentiationandapoptosisofCMLcelllineK562課題來源：國家自然科學基金(No30901757)廣東省自然科學基金((No10151008004000028)學位申請人吳兵平導師姓名馬文麗教授專業(yè)名

2、稱生物化學與分子生物學培養(yǎng)類型非定向培養(yǎng)層次碩士所在學院基因工程研究所2013年月日廣州摘要融合蛋白具有明顯增高的酪氨酸激酶活性，自發(fā)通過多條途徑進行信號轉導，干擾了正常的細胞程序，與后期細胞分化的抑制和對細胞凋亡的耐受直接相關，是CML疾病發(fā)生重要原因。隨著腫瘤發(fā)病學的深入研究，誘導分化療法成為腫瘤治療學的新思路。對人急性髓性白血病和骨髓增生異常綜合征的誘導分化治療上已獲得確切療效并進入臨床研究階段，而目前對慢性髓性白血病進行誘導分化

3、治療的研究還處于起步階段。K562細胞是體外研究白血病惡性表達調控的良好模型，可被多種誘導劑誘導向良性方向分化，研究證實氯化高鐵血紅素(Hemin)對其具有特異的紅系誘導分化作用。應用馬文麗等創(chuàng)建的RDPCR技術篩選Hemin誘導前后細胞問差異表達cDNA片段，提示OAZl與K562分化存在相關性，但其確切功能及機制還有待于進一步研究證實。此外，本實驗過程中亦發(fā)現(xiàn)OAZl對K562細胞具有潛在的誘導凋亡作用。因此，本課題旨在明確OAZI

4、對慢粒自血病K562細胞紅系分化、凋亡的作用及分子機制，為以OAZl為靶點的CML治療提供理論依據(jù)。研究方法：構建框移位點突變的OAZl過表達慢病毒載體pLVXNeo—OAZlIRESZsGreen(OAZl為人工合成目的片段687bp，合成時在框移位點處直接設置一個位點的缺失突變TCcTGATGTccGATG)，包裝病毒并感染K562細胞，G418藥物或流試細胞分選構建K562／OAZl、K562／GFP穩(wěn)轉株，采用RealtimeR

5、TPCR和Westernblot技術驗證OAZ1過表達效果。收集各組細胞(實驗組K562／OAZl、空對照組K562／GFP和未處理組K562)，F(xiàn)ACS檢測K562細胞早期紅系表面標志抗原CD71和中晚期紅系標志物血型糖蛋白A(glycophorin，GPA)，結合聯(lián)苯胺染色分析OAZl過表達對K562細胞紅系分化的作用。與此同時，我們對比Heroin誘導組，檢測與K562細胞紅系分化、癌變的關鍵基因(GATAl、BCR／ABL、TG