人B7-2轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的構(gòu)建及單克隆抗體的研制.pdf

1、譬7781470碩士學(xué)位論文(2005屆)氏87—2轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的構(gòu)建及單克隆抗體的研制PreparationofcellstransfectedB7—2andmonoelonalantibodyagainstB7—2研究生姓名指導(dǎo)教師姓名陳潔邱玉華張擘光申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)名稱研究方向論文提交日期免疫學(xué)腫瘤免疫2005年5月人B72轉(zhuǎn)基園細(xì)胞的構(gòu)建及單克隆抗體的研制摘要22872單克隆抗體的制各與純化采用本室建立的體內(nèi)誘生腹水法進(jìn)行

2、單抗的制備，腹水形成陽(yáng)性率約為80％，腹水的收獲量平均為40ml／只小鼠。經(jīng)ProteinG親和層析法純化，腹水中抗體蛋白的得率在08～50mg／ml之間。經(jīng)間接免疫熒光分析，腹水型單抗的效價(jià)為l：10000以上；純化抗體與L929／B7。2的結(jié)合量為2Ortg／5105細(xì)胞。3B72單克隆抗體的生物學(xué)特性研究31872單抗識(shí)別的抗原位點(diǎn)采用競(jìng)爭(zhēng)抑制分析法，將上述5株單抗1F9、6C8、2H6、3A7和7H9分別與L929／B7—2轉(zhuǎn)基

3、因細(xì)胞結(jié)合，再加入法國(guó)Immunotech公司鼠抗人CD86一PE(克隆號(hào)：HA5287)。流式細(xì)胞儀的分析結(jié)果顯示：?jiǎn)慰?F9和3A7能阻斷對(duì)HA5287與相應(yīng)抗原的結(jié)合，提示該兩株抗體與HA5287識(shí)別相同的抗原位點(diǎn)；6C8和7H9完全不能阻斷HA5287與相應(yīng)抗原的結(jié)合，表明608和7H9與HA5287識(shí)別不同的抗原位點(diǎn)：而2H6則部分阻斷HA5287與相應(yīng)抗原的結(jié)合，提示2H6識(shí)別的抗原位點(diǎn)可能與HA5，287部分相同。3287

4、2單抗對(duì)膜型B72分子的識(shí)別選擇天然表達(dá)B72分子的惡性淋巴瘤細(xì)胞株Raji和Daudi，將其分別與5株單抗結(jié)合，洗滌后用PE聯(lián)接的羊抗鼠IgG進(jìn)行染色，經(jīng)流式細(xì)胞儀分析。同時(shí)以L929／B7—2轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和人T淋巴瘤細(xì)胞株Jurkat分別作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照。結(jié)果顯示：5株單抗均能識(shí)別不同細(xì)胞表達(dá)的膜型B7—2分子。33872單抗對(duì)B淋巴瘤細(xì)胞株Daudi生長(zhǎng)與增殖的影響將不同濃度的B72單抗加入到天然表達(dá)B72分子的Daudi細(xì)胞的培