替米沙坦對2型糖尿病大鼠心肌NADPH氧化酶亞單位表達的影響.pdf

1、目的:
　　 用高糖、高脂飲食加小劑量鏈脲佐菌素(STZ)的方法制備2型糖尿病模型。觀察尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶亞單位Nox4、p22phox在2型糖尿病大鼠心肌組織的表達情況，討論替米沙坦對2型糖尿病大鼠心肌NADPH氧化酶亞單位Nox4、p22phox表達的影響。
　　 方法:
　　 36只清潔級Wistar雄性大鼠，利用隨機數字表法隨機分為兩組:即健康對照組（A組，n=10），和糖尿病模型

2、組(n=26)。A組大鼠普通飼料健康喂養(yǎng)，模型組大鼠給予高糖高脂配比后的飼料喂養(yǎng)。4周后，給模型組大鼠的腹腔內注射小劑量(30mg/kg)STZ。第6周末檢測空腹血糖(FBG)，如果FBG≥7.8mmol/L同時出現(xiàn)胰島素抵抗即為造模成功，20只大鼠成模。將成模大鼠隨機分為糖尿病組（B組，n=10），及替米沙坦治療組（C組，n=10），C組大鼠給予替米沙坦5mg/kg/d灌胃，予A組和B組大鼠等量的生理鹽水灌胃。持續(xù)干預12周，所有實驗

3、大鼠禁食、禁水12小時，稱體重，麻醉，靜脈取血，制備成血漿標本，取樣分別檢測空腹血糖，血脂聯(lián)素，血胰島素和血脂，利用公式計算得出胰島素敏感指數。完成檢測后大鼠處死，取出心臟，生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分，稱心臟重量。取下一部分左心室福爾馬林液固定后做成石蠟切片備免疫組織化學染色法檢測銅一鋅一超氧化物歧化酶(Cu-Zn-SOD)、結締組織生長因子(CTGF)的蛋白表達水平，另一部分左心室放入液氮中直至凍透，-70℃環(huán)境下準備用于實時熒光定量

4、聚合酶鏈反應(PCR)的方法檢測大鼠心肌Nox4、p22phoxmRNA水平的表達。
　　 結果:
　　 1.-般情況
　　 與A組正常對照組相比，B組糖尿病大鼠的空腹血糖、血漿胰島素、血總膽固醇及血甘油三酯明顯升高，心重/體重比值增大（P＜0.05），血漿脂聯(lián)素水平、胰島素敏感指數明顯降低(P＜0.05)。經替米沙坦治療后，C組大鼠空腹血糖、血漿胰島素、血總膽固醇及血甘油三酯下降，心重/體重比值減?。≒＜<0.

5、05），血漿脂聯(lián)素水平和胰島素敏感指數均上升（P＜0.05）。
　　 2.心肌組織Nox4、p22phoxmRNA表達
　　 與A組正常對照組相比，B組糖尿病大鼠心肌組織Nox4、p22phoxmRNA表達顯著增多（P＜O.05），經替米沙坦治療后，C組大鼠心肌組織Nox4、p22phoxmRNA表達下降(P＜O.05)。
　　 3.心肌組織CTGF蛋白表達
　　 與A組正常對照組相比，B組糖尿病大鼠心肌

6、組織CTGF蛋白表達顯著升高（P＜0.05），經替米沙坦治療后，C組大鼠心肌組織CTGF蛋白表達有所下降（P＜0.05）。
　　 4.心肌組織Cu-Zn-SOD蛋白表達
　　 與A組正常對照組相比，B組糖尿病大鼠心肌組織Cu-Zn-SOD蛋白表達顯著降低（P＜0.05）。經替米沙坦治療后，C組大鼠心肌組織Cu-Zn-SOD蛋白表達明顯升高(P＜O.05)。
　　 5.光鏡下觀察大鼠心肌組織HE染色
　　

7、A組大鼠心肌纖維走行整齊，無肥大，細胞核明顯可見，呈圓形或橢圓形，整齊的排列在細胞中心。B組糖尿病大鼠心肌纖維肥大，排列紊亂，腫脹，斷裂，心肌細胞邊界不清，細胞核大小不規(guī)則。替米沙坦治療后，C組大鼠較B組糖尿病大鼠心肌病理改變明顯好轉。
　　 結論:
　　 糖尿病大鼠心重/體重比值增大，心肌Nox4、p22phoxmRNA表達升高，心肌CTGF蛋白表達升高，心肌Cu-Zn-SOD蛋白表達降低，血漿脂聯(lián)素水平下降。經替米沙