辛伐他汀對(duì)高糖誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞損傷的干預(yù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 1、觀察乳鼠心肌細(xì)胞對(duì)高濃度葡萄糖刺激的反應(yīng),探討其可能的機(jī)制。
　　 2、觀察辛伐他汀對(duì)高濃度葡萄糖刺激下心肌細(xì)胞損傷的干預(yù)作用,并探討其可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、取SD乳鼠心肌細(xì)胞做原代培養(yǎng)。
　　 2、空白對(duì)照組(control組):不加任何刺激藥物,僅用含有20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)。
　　 3、高糖刺激組(high glucose,GS

2、組):含有20％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中加入終濃度為25mmol/L的葡萄糖培養(yǎng)72小時(shí)。
　　 4、辛伐他汀(simvastatin,Sim)干預(yù)組:含有20％胎牛血清的高糖(葡萄糖終濃度為25mm01/L)DMEM培養(yǎng)基中,加入終濃度分別為10-7、10-6、10-5mol/l(M)的辛伐他汀培養(yǎng)72小時(shí),分別為GS+10-7MSim組、GS+10-6MSim組、GS+10-5MSim組。
　　 5、甲羥戊酸對(duì)照組

3、(GS+MVA組):含有20％胎牛血清的高糖(葡萄糖終濃度為25mmol/L)DMEM培養(yǎng)基中,加入終濃度為0.2mmol/l(mM)甲羥戊酸培養(yǎng)72小時(shí)。
　　 6、甲羥戊酸干預(yù)組(GS+10-5MSim+MVA組):含有20％胎牛血清的高糖(葡萄糖濃度為25mmol/l)DMEM培養(yǎng)基中加入終濃度10-5M辛伐他汀及0.2mmol/l甲羥戊酸培養(yǎng)72小時(shí)。
　　 7、用MTT比色法測(cè)細(xì)胞活力,按照各自檢測(cè)試劑盒說(shuō)明測(cè)

4、定培養(yǎng)基中LDH活力、MDA含量、NO含量、SOD活力、Caspase-3表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)GSH的含量和ROS濃度,通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶p22phox、p47phox亞基mRNA的表達(dá)水平,Western blot測(cè)定細(xì)胞內(nèi)p38MAPK蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、與空白對(duì)照組比較,高糖刺激組細(xì)胞活力明顯降低(P<0.01),LDH活力、MDA水平顯著增加(P<0.01

5、),SOD活力、GSH含量顯著降低(P<0.01),ROS產(chǎn)生顯著增高(P<0.01),Caspase-3表達(dá)顯著升高(P<0.01),細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶亞基p22phox、p47phox mRNA表達(dá)明顯增加(P<0.01),分別達(dá)對(duì)照組的2.26及2.08倍；且p38MAPK蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.01),達(dá)對(duì)照組的2.6倍。
　　 2、在終濃度為25mmol/L葡萄糖基礎(chǔ)上,分別加入終濃度為10-7、10-6、10-

6、5M辛伐他汀干預(yù)后,與GS組比較,辛伐他汀(simvastatin,Sim)干預(yù)組心肌細(xì)胞活力、SOD活力、GSH含量明顯增加(P<0.05),LDH活力、MDA含量、Caspase-3表達(dá)顯著降低(P<0.05),ROS產(chǎn)生顯著降低,細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶亞基p22phox、p47phoxmRNA及p38MAPK蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05),且呈劑量依賴性。辛伐他汀濃度與心肌細(xì)胞活力顯示出良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系,隨著辛伐他汀濃度的增

7、加,心肌細(xì)胞活力相應(yīng)提高。當(dāng)辛伐他汀終濃度為10-5M時(shí),顯示出對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞最佳的保護(hù)作用,心肌細(xì)胞活力達(dá)90.80％。
　　 3、在終濃度為25mmol/L葡萄糖基礎(chǔ)上,單純加入甲羥戊酸組與加入10-5M辛伐他汀、200umol/L甲羥戊酸后,上述指標(biāo)的表達(dá)與葡萄糖刺激組無(wú)明顯差異(P>0.05),甲羥戊酸完全逆轉(zhuǎn)了辛伐他汀對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。
　　 結(jié)論:
　　 1、高濃度葡萄糖刺激誘發(fā)