大鼠局灶性腦缺血再灌注后凋亡相關基因的表達及依達拉奉的干預.pdf

1、背景與目的:腦缺血損傷后細胞凋亡受諸多基因調(diào)控。由死亡受體Fas所介導的凋亡通路主要包括Fas-FADD-Caspase-8和Fas-Daxx-ASKl兩條。其中FADD和Caspase-8在多條死亡受體介導的凋亡途徑中起著關鍵作用。Daxx則在基因轉(zhuǎn)錄和細胞凋亡兩方面發(fā)揮重要作用。FAP-1是Fas信號轉(zhuǎn)導中的負性調(diào)節(jié)因子，也是唯一與FasC端負性調(diào)節(jié)區(qū)相結(jié)合的因子。有關FADD、FAP-1和Daxx在腦缺血再灌注損害中的研究報道極少

2、。自由基清除劑依達拉奉是目前臨床證明有效的神經(jīng)保護劑，它能夠減少腦缺血損傷后細胞凋亡，但其影響細胞凋亡的機制尚不清楚。本研究通過檢測局灶性腦缺血后FADD、FAP-1和Daxx等基因在大鼠腦內(nèi)的表達變化，以探討其在腦缺血損傷中的作用，并以依達拉奉作干預，觀察其對上述基因和細胞凋亡的影響，以期為進一步研究腦缺血后細胞凋亡分子病理機制以及腦梗死的防治提供實驗基礎。 方法:10-12周齡健康雄性Sprague-Dawley大鼠186只

3、，隨機分為正常組(n=6)、假手術(shù)對照組(n=60)、腦缺血模型組(n=60)和依達拉奉治療組(n=60)，線栓法制備大腦中動脈梗阻(MCA0)模型，缺血2小時后恢復再灌注，藥物組在腦缺血再灌注即刻和12小時各腹腔注射依達拉奉3mg／kg，模型組注射等量的生理鹽水。Longa's的5級標準評分法評價神經(jīng)功能缺損。再灌注后1小時、3小時、6小時、12小時和24小時處死動物。HE染色和Nissl染色觀察病理學變化，免疫組織化學、RT-PCR

4、、western blot等方法分別檢測缺血側(cè)項葉大腦皮層FADD、FAP-l、Daxx、Caspase-8蛋白或／和mRNA表達變化；免疫熒光激光掃描共聚焦顯微鏡觀察FADD和Daxx在神經(jīng)元的定位；末端標記法原位檢測神經(jīng)細胞凋亡。 結(jié)論:(1)大鼠腦缺血急性期FADD、Daxx、Caspase-8蛋白或／和mRNA表達增加，可能參與腦缺血后促凋亡作用。(2)大鼠腦缺血急性期FAP-1mRNA和蛋白表達增加，可能參與腦缺血后抗