酪絲纈肽(YSV)對(duì)肺癌的治療作用及影響組蛋白乙酰化對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 研究三肽化合物酪絲纈肽（Tyroservatide，YSV）在體內(nèi)外的抗肺癌作用，初步探討其影響人肺癌細(xì)胞組蛋白乙?；揎棧枰旨?xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.應(yīng)用MTS法和中空纖維測(cè)定法觀察YSV對(duì)人肺癌NCI-H292細(xì)胞體外和體內(nèi)生長(zhǎng)的影響。
　　 2.應(yīng)用Annexin V/PI雙染法、DNA Ladder檢測(cè)方法觀察YSV對(duì)人肺癌NCI-H292

2、細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用；并以流式細(xì)胞術(shù)觀察YSV對(duì)人肺癌NCI-H292細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響。
　　 3.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot方法觀察YSV對(duì)人肺癌NCI-H292細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制因子p21、p27的mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　 4.應(yīng)用Western Blot方法，觀察YSV對(duì)人肺癌NCI-H292細(xì)胞組蛋白乙酰化H3、H4水平的影響；應(yīng)用熒光檢測(cè)技術(shù)和分光光度法分別觀察YSV對(duì)人肺

3、癌NCI-H292細(xì)胞的組蛋白去乙?；福℉DAC）和組蛋白乙?；福℉AT）活性的影響。
　　 5.應(yīng)用染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）方法，觀察YSV對(duì)人肺癌NCI-H292細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制因子p21、p27啟動(dòng)子相關(guān)組蛋白乙?；潭鹊挠绊憽?br>　　 結(jié)果：
　　 1.YSV在體外（0.2～3.2mg/ml）和體內(nèi)（160～320μg/kg/d）均能夠明顯抑制人肺癌NCI-H292細(xì)胞的增殖（P<0.0

4、5）。
　　 2.YSV（0.8，1.6mg/ml）能夠誘導(dǎo)人肺癌NCI-H292細(xì)胞凋亡，使凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多，形成明顯的DNA Ladder；能夠阻抑人肺癌NCI-H292細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程，使S期細(xì)胞百分比明顯增高，G2/M期百分比明顯降低（P<0.05）。
　　 3.YSV能夠上調(diào)人肺癌NCI-H292細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制因子p21、p27的表達(dá)。
　　 4.YSV能夠上調(diào)人肺癌NCI-H292

5、細(xì)胞組蛋白H3和H4的乙?；?；抑制組蛋白去乙?；傅幕钚?，對(duì)組蛋白乙?；傅幕钚晕匆娒黠@影響。
　　 5.YSV能夠誘導(dǎo)人肺癌NCI-H292細(xì)胞的細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制因子p21、p27基因啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白乙?；皆黾?，激活p21、p27基因的轉(zhuǎn)錄，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯。
　　 結(jié)論：
　　 YSV能夠明顯抑制人肺癌NCI-H292細(xì)胞的體內(nèi)外增殖，阻抑腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期，誘導(dǎo)凋亡。其作用機(jī)制是通過(guò)抑制人肺