水稻內(nèi)生細(xì)菌的研究及其殺蟲(chóng)工程菌的構(gòu)建.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文水稻內(nèi)生細(xì)菌的研究及其殺蟲(chóng)工程菌的構(gòu)建姓名：孫惠青申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：作物遺傳育種學(xué)指導(dǎo)教師：李平20030501水稻內(nèi)生細(xì)菌的研究及其殺蟲(chóng)工程菌的構(gòu)建摘要本研究從四川主要栽培水稻品種D優(yōu)527體內(nèi)共分離到102株細(xì)菌。研究了內(nèi)生細(xì)菌在水稻植株內(nèi)不同生育期、不同組織部位的動(dòng)態(tài)分布曲線(xiàn)特點(diǎn)，確定編號(hào)為sR一15、sR25、sL37的三株細(xì)菌為優(yōu)勢(shì)菌株，并進(jìn)行了優(yōu)勢(shì)菌株的回接、定殖試驗(yàn)，驗(yàn)證其內(nèi)生性。經(jīng)生理、生化

2、特性結(jié)合形態(tài)學(xué)的研究，確定了優(yōu)勢(shì)內(nèi)生菌株在微生物學(xué)上的分類(lèi)地位，并進(jìn)行了與Bt殺蟲(chóng)蛋白基因的重組，以及殺蟲(chóng)蛋白基因的表達(dá)及對(duì)水稻二化螟防治研究，驗(yàn)證了優(yōu)勢(shì)內(nèi)生細(xì)菌作為生防工程載體菌的可行性。此外，對(duì)菌株的致病性、促生性等生物學(xué)特性進(jìn)行研究。取得的主要結(jié)果如下l利用改進(jìn)的細(xì)菌分離技術(shù)，從健康栽培水稻品種D優(yōu)527的植株體內(nèi)共分離到102株細(xì)菌，從根系中分離到41株，從葉片分離到37株，從莖分離到24株。其中，革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌77株，革蘭氏陰

3、性細(xì)菌25株。利用ERIC—PCR技術(shù)對(duì)菌株基因組進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，菌株基因組間存在多態(tài)性。2對(duì)所獲得菌株進(jìn)行種群、數(shù)量的動(dòng)態(tài)分析，研究細(xì)菌在根、莖、葉內(nèi)隨水稻生育期變化的動(dòng)態(tài)分布情況，其中，水稻分蘗期和孕穗期是細(xì)菌種群數(shù)量分布的高峰時(shí)期。3根據(jù)種群分布特點(diǎn)，初步確定SR一15、sR25、SL37為優(yōu)勢(shì)種群，而SR一15優(yōu)勢(shì)性尤為明顯，并確定了SR15、SR25、SL37菌株在不同生育期數(shù)量動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)，其中，s艮15在分蘗期和孕穗期

4、數(shù)量分布高于其它兩菌株。4對(duì)SR—15、SR一25、SL37菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，菌株的生長(zhǎng)均符合細(xì)菌生長(zhǎng)的典型的生長(zhǎng)曲線(xiàn)，在不同pH、溫度、培養(yǎng)基條件下，菌株生長(zhǎng)的動(dòng)態(tài)變化各有差異，且與相關(guān)報(bào)道的內(nèi)生細(xì)菌生長(zhǎng)特性具有一定的相似性。5轉(zhuǎn)pucl8標(biāo)記驗(yàn)證內(nèi)生性試驗(yàn)結(jié)果表明，在不同電壓下，電擊轉(zhuǎn)化細(xì)菌的效率不同，在電壓為1500V時(shí)轉(zhuǎn)化效率最高，而pucl8使用量對(duì)轉(zhuǎn)化效率影響不明顯。轉(zhuǎn)帶抗生素標(biāo)記的pucl8于優(yōu)勢(shì)細(xì)菌，回