家蠶核型多角體病毒ORF79基因(bm79)的結構和蛋白互作分析.pdf

1、家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus，BmNPV）感染家蠶引起的家蠶血液型膿病是目前蠶絲產業(yè)最為常見和危害嚴重的蠶病之一，每年對蠶絲業(yè)造成了巨大的損失。隨著1999年BmNPV全基因組序列的測定，其基因功能的研究己成為研究重點。盡管其在侵染過程中發(fā)揮重要作用的相關基因已陸續(xù)被注釋，但BmNPVORF79(bm79)作為桿狀病毒核心基因之一，它的功能仍然不清楚。因此本文主要對BmNPVORF

2、79基因的結構以及與其他蛋白相互作用做了研究。主要研究結果如下:
　　 1.bm79基因克隆及轉錄分析
　　 克隆得到的bm79基因位于BmNPVT3株基因組的76132-76678bp，全長549bp，編碼一個含有182個氨基酸殘基的蛋白，預測分子量約為20.9KD。bm79的起始密碼子ATG上游145bp存在著桿狀病毒的晚期轉錄基序TTAAG，終止密碼子TAA的下游74bp和84bp存在轉錄終止信號AATAAA。用S

3、ignalIP軟件對基因進行信號肽預測，發(fā)現(xiàn)在其N端包含一個22個氨基酸殘基的信號肽。同源基因保守性分析結果表明，bm79蛋白氨基酸序列在已測序的桿狀病毒中高度保守(＞90％)。bm79基因轉錄時相分析結果表明bm79是一個晚期基因，并在感染晚期持續(xù)高量表達。
　　 2.BM79蛋白表達及核定位信號鑒定
　　 構建BM79的C端融合DsRed熒光蛋白的BM79表達載體pIZ-DsRed-BM79，以pIZ-DsRed和p

4、IZ-DsRed-PIF3作為對照，轉染BmN-SWU1細胞后，免疫熒光法檢測BM79蛋白在家蠶細胞內的表達情況，發(fā)現(xiàn)BM79蛋白在細胞質和細胞核內均有分布，而且在細胞核內分布量明顯高于細胞質內。另外，在BmNPV病毒感染細胞的情況下，BM79蛋白分布情況不受影響，說明BM79蛋白在細胞內的分布不受其他病毒因子的影響。進一步構建BM79蛋白截短多肽表達載體，免疫熒光檢測結果表明，BM79蛋白C端Q151-N165氨基酸序列具有核定位功能

5、，指導BM79蛋白由胞質向核內轉運。
　　 3.BM79蛋白與其他蛋白的相互作用
　　 構建BiFC重組病毒vBiFC-BM79-VNVC、vBiFC-BM79-E66、vBiFC-BM79-PIF1、vBiFC-BM79-PIF2和vBiFC-BM79-PIF3，感染BmN-SWU1細胞后，熒光信號檢測結果表明，在細胞中表達的PIF1、PIF2、PIF3和ODV-E66分別與BM79存在相互作用關系。進一步免疫共沉淀實