姜黃素抑制組蛋白乙?；钄嗑凭T導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的：
　　母孕期酒精暴露可能導(dǎo)致胎兒心臟發(fā)育異常，但其發(fā)生機(jī)制尚不十分清楚?？偹苤凭巧钪谐Ｒ姷闹禄镔|(zhì)，能夠引起心肌細(xì)胞凋亡和心臟發(fā)育異常。我們課題組前期研究表明組蛋白乙酰化在酒精暴露引起心臟發(fā)育異常中起到關(guān)鍵作用。這篇文章進(jìn)一步探討組蛋白乙?；欠裨诰凭鸬男募〖?xì)胞凋亡中發(fā)揮了重要作用。
　　方法：
　　（1）C57孕鼠隨機(jī)分為酒精組和對(duì)照組，于E7.5天分別給予56%酒精（10μl/g）和等量生理鹽水灌

2、胃至E15.5天，收集E17.5天胎鼠心臟進(jìn)行以下檢測(cè)：
　　①Westernblot檢測(cè)組蛋白H3K9乙?；?；
　?、赒-PCR檢測(cè)凋亡基因caspase-3、caspase-8和bcl-2 mRNA表達(dá)水平，Westernblot檢測(cè)caspase-3、active-caspase-3、caspase-8、active-caspase-8和bcl-2蛋白表達(dá)水平；
　?、跜hIP-Q-PCR檢測(cè)凋亡基因casp

3、ase-3、caspase-8和bcl-2啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3K9乙酰化水平；
　?、躎UNEL檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡水平。
　?。?）心肌祖細(xì)胞分為酒精組、姜黃素組、酒精+姜黃素組、對(duì)照組、DMSO組，分別給予120μl PBS、200mM酒精、25μM姜黃素、200mM酒精+25μM姜黃素、25μl DMSO，干預(yù)24小時(shí)后收集細(xì)胞進(jìn)行以下檢測(cè)：
　?、賅estern blot檢測(cè)組蛋白H3K9乙?；剑?br>　?、?/p>

4、Western blot檢測(cè)caspase-3、active-caspase-3、caspase-8、active-caspase-8和bcl-2蛋白表達(dá)水平；
　?、哿魇綑z測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：
　?。?）Westernblot結(jié)果顯示酒精暴露后，組蛋白 H3K9乙?；矫黠@升高（P＜0.05）。
　?。?）Q-PCR結(jié)果顯示酒精暴露后，胎鼠心臟凋亡基因caspase-3、caspase-8 mRNA水平升

5、高，抗凋亡基因bcl-2 mRNA水平降低（P＜0.05）。Westernblot結(jié)果顯示酒精暴露引起 active-caspase-3和active-caspase-8表達(dá)升高，引起caspase-3、caspase-8和bcl-2表達(dá)降低（P＜0.05）。
　?。?）ChIP-Q-PCR結(jié)果顯示酒精暴露后，caspase-3和caspase-8啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3K9乙?；缴?，而 bcl-2啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白H3K9乙酰化

6、水平降低（P＜0.05）。
　?。?）TUNEL結(jié)果顯示酒精暴露引起胎鼠心肌細(xì)胞凋亡水平升高，而對(duì)照組無凋亡細(xì)胞出現(xiàn)（P＜0.05）。
　　（5）Westernblot結(jié)果顯示酒精干預(yù)能夠引起心肌祖細(xì)胞組蛋白H3K9乙?；缴撸≒＜0.05），而姜黃素干預(yù)能夠阻斷酒精引起的組蛋白H3K9高乙?；≒＜0.05）。
　?。?）Westernblot結(jié)果顯示酒精干預(yù)能夠引起心肌祖細(xì)胞凋亡基因active-caspase

7、-3和active-caspase-8表達(dá)升高，引起caspase-3、caspase-8和bcl-2表達(dá)降低（P＜0.05），而姜黃素干預(yù)能夠阻斷該變化。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示酒精干預(yù)能夠引起心肌祖細(xì)胞凋亡水平升高（P＜0.05），而姜黃素干預(yù)能夠阻斷酒精引起的心肌祖細(xì)胞凋亡水平升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）酒精暴露可能通過上調(diào)組蛋白 H3K9乙?；蕉鹦募〖?xì)胞凋亡。
　?。?）組