禽大腸桿菌ESBLs動(dòng)力學(xué)及中藥提取物對(duì)其抑制作用的研究.pdf

1、本論文選擇了20株臨床分離的產(chǎn)ESBLs大腸桿菌，在確定了中藥提取物中主要抗菌成分含量的基礎(chǔ)上，測(cè)定了多類抗菌藥及中藥提取物對(duì)產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的抗菌活性，對(duì)TEM-7v、TEM-8v、TEM-9v和CTX-M-1V型ESBLs的生化特性進(jìn)行了深入研究，并對(duì)觀察了舒巴坦和中藥提取物對(duì)ESBLs的抑制作用，為臨床有效治療禽大腸桿菌感染，從中藥中篩選β-內(nèi)酰胺酶抑制劑及開發(fā)中西復(fù)方制劑提供依據(jù)。 試驗(yàn)結(jié)果表明：產(chǎn)ESBLs大腸桿菌

2、對(duì)阿莫西林和頭孢噻呋均嚴(yán)重耐藥，其MIC50和MIC90為非產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的10倍以上；β-內(nèi)酰胺酶抑制劑舒巴坦可明顯提高產(chǎn)ESBLs大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的抗菌活性，其中可使阿莫西林對(duì)產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的MIC50從146.17 μg/ml降為29.66 μg/ml，使頭孢噻呋的MICso從106.22 μg/ml降為21.31 μg/ml，均接近敏感范圍。同時(shí)產(chǎn)ESBLs大腸桿菌對(duì)氨基糖苷類、氯霉素類和氟喹諾酮類抗生素

3、表現(xiàn)出不同程度的耐藥。 黃連素、黃芩苷、連翹苷和白芍苷都是主要的抗菌成分，經(jīng)高效液相測(cè)得黃連提取物中黃連素含量為99.32％，黃芩提取物中黃芩苷為93.65％，而連翹提取物中的主要成分連翹苷含量為34.37％，白芍提取物中的白芍苷僅為12.03％。4種中藥提取物對(duì)產(chǎn)與非產(chǎn)ESBLs大腸桿菌均有相同的抗菌作用，均以白芍的抗菌活性最強(qiáng)，其對(duì)產(chǎn)和非產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的MICm分別為0.29，0.22，連翹、黃芩次之，黃連的抑菌效果最

4、差，其對(duì)產(chǎn)和非產(chǎn)ESBLs大腸桿菌的MICm則分別為10.37，9.56。且頭孢噻呋與白芍聯(lián)用協(xié)同作用最強(qiáng)，20株產(chǎn)ESBLs大腸桿菌中有15株FIC≤0.5，頭孢噻呋與其它3種中藥提取物的聯(lián)合均未見(jiàn)拮抗作用。 利用純化后的β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：TEM-1β-內(nèi)酰胺酶對(duì)青霉素類的水解均強(qiáng)于對(duì)頭孢菌素的水解，且TEM-1對(duì)青霉素類的親和力及相對(duì)水解效率在5種酶中是最高的。TEM-7V、TEM-8V、TEM-9V均

5、能部分水解第三代頭孢菌素頭孢噻肟和頭孢噻呋，除TEM-8V外，其對(duì)頭孢菌素類的親和力均大于青霉素類，但由于對(duì)頭孢類的最大水解速率較小，所以其對(duì)頭孢菌素類抗生素的水解能力小于青霉素。CTX-M-1V對(duì)第三代含肟基頭孢菌素頭孢噻肟和頭孢噻呋均有較強(qiáng)的親和力。舒巴坦對(duì)4種ESBLs都有不同程度的抑制作用，Ki值范圍為0.12～1.88，IC50范圍為1.03～2.26，其中對(duì)TEM-7V的Ki值最大，說(shuō)明TEM-7V有一定的酶抑制劑作用。從中