慢病毒介導shRNA干擾SNAIL表達對肝癌細胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及細胞生長的研究.pdf

1、目的:
　　1）RNA干擾技術(shù)抑制人肝癌HepG2細胞系SNAIL的表達，觀察對HepG2細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化表型及細胞生長的影響。
　　2)建立慢病毒載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人肝癌細胞系，并觀察LV(慢病毒)-SNAILsiRNA(SNAIL小干擾RNA)載體對HepG2細胞系SNAIL表達的干擾效果，為實驗觀察提供必備條件。
　　方法:構(gòu)建3組干擾SNAIL表達shRNA質(zhì)粒，并通過轉(zhuǎn)染細胞從中選取干擾效果最好的片段，構(gòu)建慢病毒

2、載體，獲得LV-SNAILsiRNA載體。將LV-SNAILsiRNA及不針對任何已知mRNA的LV-nonsence-siRNA轉(zhuǎn)染HepG2細胞系，得到SNAIL表達受抑制的LV-SNAILsiRNA組細胞以及SNAIL表達不受抑制的LV-Control-GFP組細胞，并同時與空白HepG2細胞（Control組）對照，用MTT技術(shù)檢測3組細胞的增殖狀態(tài)和活性。并分別用定量PCR和Western Blot技術(shù)來檢測SNAIL以及E-

3、cadherin在mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1）成功構(gòu)建LV-SNAILsiRNA慢病毒載體，并證明它能有效持續(xù)抑制HepG2細胞系中SNAIL基因的表達(P＜0.05 vs.control)。
　　2) Control組及LV-Control-GFP組細胞:SNAIL表達較強，而E-cadherin表達較弱;而與實驗組細胞相比，通過LV-SNAILsiRNA對SNAIL的RNA干擾有效抑制了H

4、epG2細胞的生長(P＜0.05 vs.control)，同時也使E-cadherin mRNA和蛋白質(zhì)表達水平上升(P＜0.05 vs.control)。
　　結(jié)論:通過LV-SNAILsiRNA慢病毒載體能夠持續(xù)有效抑制人肝癌HepG2細胞系中SNAIL的表達，并能使E-cadherin表達水平上升，從而抑制HepG2細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。另外，SNAIL的表達可能通過抑制E-cadherin從而促進肝癌細胞EMT的發(fā)生，是H