圓錐角膜組織與正常角膜組織差異蛋白的表達及其和圓錐角膜發(fā)病關系的初步研究.pdf

1、圓錐角膜(keratoconus)是一種以角膜擴張為特征，致角膜中央部向前呈圓錐形凸起，及產生高度不規(guī)則近視散光和不同視力損害的原發(fā)性疾病。若病變持續(xù)發(fā)展，最終的結果是行角膜移植術。所以探明病因及發(fā)病機制，采取有效的控制手段，是防治圓錐角膜的根本。 目的：運用比較蛋白質組學技術，比較圓錐角膜組織和正常角膜組織的差異表達蛋白，篩選出圓錐角膜特異性分子標記物，探討其與圓錐角膜發(fā)病機制的關系。 方法：收集12例圓錐角膜組織和4

2、例正常人角膜組織，提取角膜組織總蛋白，行固相PH梯度雙向凝膠電泳，分析凝膠電泳圖譜，篩選差異表達蛋白，采用基質輔助激光解吸離子化一串聯飛行時間質譜(MOLDI-TOF／TOF-MS)和數據庫檢索對差異蛋白質進行鑒定。 結果： 1、建立了穩(wěn)定性較好、分辨率高的人圓錐角膜組織和正常角膜組織的雙向凝膠電泳圖譜(17cm IPG膠條PH5-8)； 2、圓錐角膜組織和正常角膜組織的雙向電泳代表膠的蛋白點數分別為1035和1

3、070，匹配點數為869個，匹配率為84％。選取有明顯表達差異的7個蛋白質點，其中6個蛋白質點在圓錐角膜組織中表達下調，1個蛋白質點表達上調。 3、對7個差異表達蛋白質點進行MALDI-TOF／TOF-MS的鑒定，共獲得7張蛋白質點的肽質量指紋圖譜(PMF)及二級質譜圖(MS／MS)，成功鑒定出的7個蛋白質點分別為轉化生長因子β誘導的細胞外基質黏附蛋白(TGFBIp／βig-h3)、Ⅵ型膠原蛋白α1鏈前體(collagen al

4、pha-1(Ⅵ)chain precursor)、αA-晶體蛋白(alpha-crystallin A)、αB-晶體蛋白(alpha-crystallin B)、βB2-晶體蛋白(beta-crystallin B2)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase)、碳酸酐酶(carbonic anhydrase)，除Ⅵ型膠原蛋白α1鏈前體在圓錐角膜組織中表達上調外，其余6個蛋白成分在圓錐角膜組織中均表達下調。 結論